[发明专利]一种天然组织来源的脱细胞双相腱膜肌肉的脱细胞材料及制备方法

说明书

本发明公开了一种天然组织来源的脱细胞双相腱膜肌肉的脱细胞材料及制备方法，脱细胞材料包括胰酶、无菌1‑2M的氯化钠、Triton X‑100、十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠、Triton X‑200、乙醇、的叠氮化钠和液氮。本发明成功制造了一种双相复合材料，互补了腱膜细胞外基质的力学性能和肌肉细胞外基质的再生肌肉的生物学效应，可以更好地促进腱膜和肌肉组织的再生，使缺损再生的新生组织更符合原有腹壁生理结构，相对于不可降解补片，本材料体内可降解，较好地避免了材料长期残留带来的远期不良反应。

技术领域

本发明属于疝气修复及其再生技术领域，具体涉及一种天然组织来源的脱细胞双相腱膜肌肉的脱细胞材料及制备方法。

背景技术

腹壁疝是临床常见疾病，其可造成腹腔内容物的异常脱出，形成腹壁肿块，严重时可引起肠嵌顿，坏死。而目前常见的疝修补常采用人工聚乙烯等无生物活性材料，其不可降解，在长期体内植入中可引起慢性疼痛，炎症，感染，疝气复发等风险。作为一种以被动力学支持的惰性材料，人工合成补片通常引起纤维化来加强力学支持，而不能恢复正常的腹壁结构。腹壁由皮肤，皮下脂肪，腹壁肌肉，腱膜，肌筋膜，腹膜组成。腱膜和肌筋膜等腱性组织提供抗张力学支持，而肌肉可调节腹内压。因此，单纯纤维化不能完全恢复正常腹壁功能。而此前有文献报道，肌肉细胞外基质和肌腱细胞外基质可分别促进肌肉和肌腱修复。因此，本发明尝试用新工艺获取肌肉和腱膜细胞外基质复合体，来解决腹壁肌肉和腱膜无法再生的困难。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种天然组织来源的脱细胞双相腱膜肌肉的脱细胞材料及制备方法。

a)为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：对天然组织来源的肌肉腱膜组织进行脱细胞处理。所述的天然组织来源的肌肉腱膜组织来源为哺乳动物腱膜肌肉组织；所述的脱细胞技术包括胰酶、NACL、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)、脱氧胆酸钠、Triton X-200，叠氮化钠等化学试剂和物理冻融法组成的脱细胞方案，具体包括以下步骤：将初步物理去除腱膜周边脂肪组织；

b)将腱膜肌肉复合体裁剪为5*5cm长宽，5-10mm厚度；

c)将腱膜肌肉复合体放入液氮中10s，再拿出放入蒸馏水中，反复3次。

d)将腱膜肌肉复合体放置于质量分数为0.3％的叠氮化钠蒸馏水溶液中，以200转/秒的速度震荡1-2天；

e)将腱膜肌肉复合体浸入质量分数为75％的乙醇中，100转/秒的速度震荡1-2天；

f)重复步骤d；

g)将腱膜肌肉复合体放置于质量分数为1-2％的十二烷基硫酸钠中，以150转/秒的速度震荡1天；

h)将腱膜肌肉复合体放置于质量分数为2-4％的Triton X-100中，以150转/秒的速度震荡1天；

i)重复g,h步骤2-4次；

j)将腱膜肌肉复合体浸入质量分数为0.5％-1.5％的胰酶溶液中，37℃静置12-48小时；

k)将腱膜肌肉复合体放置于无菌蒸馏水中，以200转/秒的速度震荡12小时；

l)将腱膜肌肉复合体放置于无菌1-2M的氯化钠中，以200转/秒的速度震荡1天；

m)将腱膜肌肉复合体放置于质量分数为2-10％的脱氧胆酸钠中，以120转/秒的速度震荡1-3天；

n)将腱膜肌肉复合体放置于质量分数为1-8％的Triton X-200溶液中，以150转/秒的速度震荡1天；

o)将腱膜肌肉复合体放置于无菌蒸馏水中，以200转/秒的速度震荡7天，每12小时换液；

p)得到脱细胞双相腱膜肌肉。