[发明专利]一种检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法

说明书

本发明涉及，一种铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法,属于电化学免疫传感器领域。本发明以铂纳米粒子功能化的花状氧硫化铜作为基底材料，以含有双氧水的磷酸缓冲溶液作为底液，采用电化学传感器的层层修饰方法，构建了信号减弱型电化学免疫传感器，实现了在1.0 fg/mL~50.0 ng/mL线性范围内对降钙原的灵敏检测，检测限为0.33 fg/mL。

技术领域

本发明涉及一种检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法。具体是采用铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜作为传感平台，获得了一种检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法，属于电化学免疫传感领域。

背景技术

降钙素原( Procalcitonin，PCT) 是无激素活性的降钙素前肽糖蛋白，在严重系统感染特别是细菌感染的条件下，释放到患者循环系统的可溶性蛋白。正常生理状态下，CALC-1基因转录表达的PCT局限于甲状腺C细胞及肺的神经内分泌细胞κ细胞上，PCT在健康人体内浓度非常低，且男性体内PCT水平高于女性。PCT反映了全身炎症反应的活跃程度，影响PCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。 PCT浓度的升高出现严重休克、全身性炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能紊乱综合征(MODS)等一系列症状。PCT是诊断是监测细菌炎性疾病感染的一个重要参数。因此，准确检测血清中PCT对炎症的早期诊断至关重要并且对进一步指导治疗具有重要意义，如何实现对降钙素原高效准确的检测是目前急需解决的问题。

电化学免疫传感器通常是用于解决超痕量重要疾病标记物和环境污染物等的检测手段。免疫传感器是基于抗原和抗体之间的特异性结合。它是一种用来分析或确定一种特定的物质的化学测试手段。其中分析物通常是在血液或者是体液中。这种结合分析具有较高的敏感性和较好的特异性。铂纳米粒子作为一种贵金属纳米粒子其具有一系列优良特性，如小尺寸、生物相容性好、导电性好和催化活性优异等。这一系列优点使其在电化学免疫传感器中得到了越来越多的应用。并且铂纳米粒子可以直接和抗体通过化合建相结合，操作简单。氧硫化铜作为载体是一种纳米材料其具有许多优点，其中花状的氧硫化铜具有褶皱的形貌，这种褶皱形貌可以固载更多的铂纳米粒子从而增加了抗体的固载而提高信号。因此，铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜作为基底材料构建电化学免疫传感器对提高传感器的性能具有重要作用。本发明采用无标记型电化学免疫传感器，结合放大技术，提高了传感器灵敏度和检测限，实现了对降钙素原的快速高效检测。

发明内容

本发明的目的之一是合成花状氧硫化铜纳米材料，在合成的过程中通过调节三水合硝酸铜、硫代乙酰胺和肼的量合成不同形貌的花状氧硫化铜纳米材料。

本发明的目的之二是合成具有优异催化性能的铂纳米粒子作为抗体的载体，其中铂纳米粒子具有均匀尺寸和大量催化位点的等优异的催化性能，从而增大催化信号。

本发明的目的之三是合成铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜纳米材料，其中在合成的过程中通过调节铂纳米粒子溶液的浓度可合成不同浓度的铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜纳米材料。

本发明的目的之四是以铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜作为基底材料大量固载捕获抗体，以降钙素原抗原作为目标分析物，利用抗原-抗体之间的免疫反应，构建信号减弱型电化学免疫传感器，根据降钙素原抗原固定在在电极表面前后电化学信号的变化，实现对降钙素原的定量检测。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

1. 本发明所述的一种检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法，所述电化学免疫传感器。制备步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极分别用0.05、0.3和1.0 mm氧化铝粉打磨抛光至镜面，再用超纯水洗涤干净；

（2）铂纳米粒子功能化氧硫化铜是利用400 µL铂纳米粒子和2 mL的2.0 mg/mL氧硫铟化铜室温下振荡24 h，离心，溶解于2 mL的去离子水；