[发明专利]一种高稳定性的磺胺类药物抗体hAb 4D11及其应用

说明书

本发明涉及生物技术和免疫检测领域，具体涉及一种高稳定性的磺胺类药物抗体hAb 4D11及其应用。所述的抗体hAb 4D11包括重链及轻链，所述重链是对SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列进行特定位点的氨基酸残基置换所得到的；所述轻链是对SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列进行特定位点的氨基酸残基置换所得到的。本发明中的抗体hAb 4D11在识别磺胺类药物的性能并未改变的情况下，同时具有耐热性和耐有机溶剂性，而且，该抗体还具有较为广泛的识别范围。利用本发明提供的重组抗体hAb 4D11，在样本前处理时无需氮吹、复溶，仅需提取后稀释，便可用于检测，有利于缩短检测时间，提高检测效率。

技术领域

本发明涉及生物技术和免疫检测领域，具体涉及一种高稳定性的磺胺类药物抗体hAb 4D11及其应用。

背景技术

磺胺类药物(sulfonamides,SAs)是一类抗菌谱较广、价格低廉、种类较多的化学合成抗菌剂，目前广泛用于兽医临床、畜牧和水产养殖中，来预防和治疗细菌感染性疾病。但其不合理使用甚至滥用，易造成SAs在动物源食品中残留，继而威胁人类健康和食品安全。除了从源头上控制SAs的不合理使用外，对动物源食品中的药物残留进行检测及监控，是保障食品安全的重要措施。因此有必要建立简便、快速、灵敏、广谱的残留检测方法。

目前，SAs残留的检测主要使用色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)的理化分析方法。而该方法需要的仪器较为昂贵、样品前处理较为复杂、人员及操作较为专业，繁琐费时、检测成本较高，且不能现场操作，不适于大批量样本的快速筛查。

以抗原和抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的免疫分析技术，具有速度快、成本低、灵敏度高的特点，目前被新修订的《食品安全法》认可，并被广泛用于动物源食品中SAs的快速筛查。

通过小鼠免疫、脾细胞与瘤细胞融合、单克隆筛选，制备获得的单克隆抗体(mAb)，通常其对有机溶剂的耐受性能和热稳定性较差。而乙腈和甲醇等有机溶剂为样本前处理常用的试剂，因此常常需要在提取后，经过氮吹、复溶、稀释等步骤来减弱有机溶剂对免疫分析的影响。通过基因重组来制备重组抗体(hAb)，以提升其对有机溶剂的耐受性能和热稳定性，则可减化样本的前处理流程，从而缩短检测时间，提高检测效率。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种具有高稳定性、且其识别磺胺类药物的性能并未改变的磺胺类药物抗体hAb 4D11及其应用。

为了实现上述目的，本发明首先提供了一种高稳定性的磺胺类药物抗体hAb4D11，包括重链及轻链，

所述重链是基于SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，将包括第1、5–6、9–10、12–13、16、23、38、40、43、67–68、71、74、76–77、83–84、87–88、91和114位在内的一个或多个氨基酸残基置换为其他氨基酸所得到的；所述重链的氨基酸序列与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列有至少94％的一致性；

所述轻链是基于SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，将包括第3、9、12–13、15、17、19、22、46、62、64、72–73、78、80–85、87、104和108位在内的一个或多个氨基酸残基置换为其他氨基酸所得到的；所述轻链的氨基酸序列与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列有至少89％的一致性。

作为优选，所述重链在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中，至少进行了下列一个位点的置换：

第1位的谷氨酰胺置换为谷氨酸(Q1E)；

第5位的谷氨酰胺置换为缬氨酸(Q5V)；

第6位的谷氨酰胺置换为谷氨酸(Q6E)；

第9位的丙氨酸置换为甘氨酸(A9G)；

第10位的谷氨酸置换为甘氨酸(E10G)；