[发明专利]一种干酪中黄曲霉毒素M1的检测方法

说明书

本发明公开了一种干酪中黄曲霉毒素M1的检测方法。研究干酪中黄曲霉毒素的提取、净化及富集方法，结合亲水亲脂平衡柱萃取高效液相色谱法检测干酪中的黄曲霉毒素M1。本研究利用一种亲水亲脂平衡柱萃取黄曲霉毒素M1。与现有标准中黄曲霉毒素测方法相比，OASIS HLB固相萃取净化柱对于黄曲霉毒素M1的分离纯化效果很好；干酪中的黄曲霉毒素在8min内被快速检出，平均回收率较高，相对标准偏差(RSD)为1.4％～5.7％，最低检出限为0.037μg/kg。对比现行国标GB5413.37‑2010中第二法的分析时间(100min)，本方法检测速度提高了40min。本发明具有检测所用有分析时间短，操作简单、快捷、检测成本低、准确等特点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域和食品安全检测领域，具体涉及一种干酪中黄曲霉毒素M1的快速检测方法。

背景技术

干酪是由牛奶经发酵制成的一种营养价值很高的食品。近年来由于我国人民生活水平提高，干酪的人均消费量也在逐年增加。但是，干酪在制作、成熟过程中由于原料、工艺参数控制等原因易产生危害人体健康的生物毒素，其中黄曲霉毒素M1(AFM1)是干酪中较常见生物毒素，是黄曲霉和寄生曲霉的次级代谢产物，对人体的危害较大。

黄曲霉毒素的产生主要是由于含有这些真菌的食品以及饲料等基质在适宜的温度与湿度条件下，加工或保藏过程中所分泌的。食品污染中最常见的黄曲霉毒素主要有黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)。其中黄曲霉毒素B1是最为常见的种类。AFM1就是由黄曲霉毒素B1在生物体内产生的主要代谢产物，是一种强烈的致癌物。哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，黄曲霉毒素B1在体内经过一系列的代谢过程而生成AFM1。由于其易于在牛乳中出现，如果被AFM1污染的原料乳应用于干酪的制作，对于干酪消费者的身体健康必然带来极大危害。因此针对干酪中AFM1的检测和监控十分有必要。

目前国内外形成了很多针对黄曲霉毒素的检测技术，主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱串联质谱法(HPLC-MS)、酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析。TLC虽然简便，但灵敏度差。ELISA方法具有重复性差、试剂寿命短需要低温保存的缺点。目前对于黄曲霉毒素M1的定性，定量检测主要采用免疫亲和层析高效液相色谱法。此方法检测灵敏度高，检测限低。但是存在检测结果易受免疫亲和柱柱效的影响，亲和柱成本过高等问题。本发明利用一种成本更低，柱效时间更长的，亲水亲脂平衡柱对黄曲霉毒素M1进行分离纯化，采用高效液相色谱仪对干酪中的黄曲霉毒素M1进行定性，定量分析。通过对干酪中黄曲霉毒素M1的提取，净化等步骤进行改良优化，以达到快速，准确检测干酪中黄曲霉毒素M1的目的。

发明内容

有鉴于此，通过对黄曲霉毒素M1的提取、净化等步骤进行优化，以达到快速、准确检测干酪中黄曲霉毒素M1的目的。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种干酪中黄曲霉毒素M1的快速检测方法：包括以下步骤：

(1)黄曲霉毒素M1标准工作液的配制：AFM1标准储备液浓度为10μg/ml。

(2)以10％乙腈溶液分别配制质量浓度为0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL的黄曲霉毒素M1标准工作液，进行色谱分析，通过色谱分析得出相应的质量浓度所对应的峰面积平均值。再按照标准曲线得到食品样品中黄曲霉毒素M1的含量。

其中所述的高效液相色谱法包括以下条件：色谱柱：大连依利特Hypersil ODS2(5μm，250mm×4.6mm)。柱温为30℃；流动相为25％乙腈水溶液；流速为1mL/min梯度洗脱，在25min内乙腈质量分数从30％升到100％。进样量为10μL；荧光检测器波长为Ex＝365nm，Em＝450nm；