[发明专利]ROCK抑制剂在肿瘤免疫治疗中的新用法

说明书

本发明涉及ROCK抑制剂在肿瘤免疫治疗中的新用法，具体提出了ROCK激酶抑制剂在制备药物中的用途，所述药物用于抑制肿瘤免疫逃逸或增强肿瘤免疫。发明人发现，用ROCK激酶抑制剂如Y‑27632来抑制MSN磷酸化，可以导致PD‑L1的表达水平下降，从而触发T细胞的活化。因此，ROCK激酶抑制剂如Y‑27632制备的药物可以有效用于肿瘤(如乳腺癌)的免疫治疗。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及ROCK抑制剂在肿瘤免疫治疗中的新用法，更具体地，本发明涉及ROCK激酶抑制剂在制备药物中的用途，ROCK激酶抑制剂在制备试剂盒中的用途，药物组合物，试剂盒，试剂在制备药物中的用途，试剂在制备试剂盒中的用途，以及筛选药物的方法。

背景技术

免疫检查点抑制剂如抗PD(L)1抗体已经被批准用于治疗几种具有优异的临床结果的肿瘤类型。实验结果显示，抗PD-L1疗法可有效治疗三阴性乳腺癌。应用抗PD(L)-1疗法治疗癌症的主要问题是低反应率和免疫抗性。PD-L1和抗癌药物的联合治疗为提高抗PD(L)-1的治疗效率提供了新的思路。因此，深入了解PD-L1表达的调节机制将为乳腺癌的联合治疗提供新的靶点。

PD-L1与T细胞中的PD-1配体结合，从而导致T细胞失活和凋亡，而免疫疗法的效率与肿瘤内CD8⁺T细胞的数量和活性密切相关。PD-L1由几种细胞因子诱导，例如I型和II型干扰素，肿瘤坏死因子α(TNF-α)和VEGF。PD-L1 mRNA水平可以被3'-UTR下调，然而在多种癌症中，通常3'-UTR已被破坏。作为跨膜蛋白，PD-L1的表达可以通过翻译后修饰广泛调节，例如磷酸化，糖基化，乙酰化，棕榈酰化和泛素化。

Moesin(MSN)属于ERM家族，其包括埃兹蛋白，radixin和moesin。ERM蛋白在调节细胞表面结构如微绒毛和膜褶皱以及特殊的膜结构域如肠道中的纤维、光感受器稳定性和有丝分裂皮质硬化中发挥关键作用。关于生物化学特征，MSN蛋白质由氨基末端的FERM结构域和C末端ERM结合结构域(C-ERMAD)组成，其中C-ERMAD能够结合FERM结构域或F-肌动蛋白。在无活性构象中，N末端FERM结构域与C末端区域结合，而在磷酸化介导的活性构象中，释放的FERM结构域与膜蛋白如CD44、CD43相互作用，并且C末端结构域与肌动蛋白细胞骨架结合。MSN的激活受几种激酶的调节，包括rho相关蛋白激酶(ROCK)，其在MSN苏氨酸558处磷酸化以抑制分子间头尾关联。

近年来，国内外应用PD-L1抗体治疗肿瘤取得了重大进展，免疫治疗被认为是继手术、化疗与放疗之后肿瘤治疗的又一重要手段。因此，研究PD-L1水平的调控对对提高抗PD-L1免疫治疗水平以及其他抗癌药物联合治疗效果至关重要。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

鉴于目前对乳腺癌中PD-L1调节机制的理解有限，发明人采用质谱来筛选PDL-1相互作用蛋白。通过分析乳腺癌TCGA数据库中丰度较高的蛋白，发明人发现MSN与PD-L1表达呈正相关。此外，发明人发现，ROCK介导的MSN Thr558磷酸化是PD-L1稳定化所必需的，且MSN磷酸化水平与PD-L1表达呈正相关。进一步地，发明人发现，抑制乳腺癌中MSN的表达或用ROCK激酶抑制剂如Y-27632来抑制MSN磷酸化，可以导致PD-L1的表达水平下降，从而触发T细胞的活化。且体内研究证明，ROCK激酶抑制剂通过激活T细胞和NK细胞的活性(免疫反应)来实现与anit-PD1抗体相似的抗肿瘤活性。由此，ROCK激酶抑制剂可以有效用于抑制肿瘤免疫逃逸或增强肿瘤免疫

为此，在本发明的第一方面，本发明提出了ROCK激酶抑制剂在制备药物中的用途，所述药物用于抑制肿瘤免疫逃逸或增强肿瘤免疫。发明人发现，用ROCK激酶抑制剂如Y-27632可以抑制MSN磷酸化，从而导致PD-L1的表达水平下降，进而触发T细胞的活化，从而实现免疫治疗肿瘤如乳腺癌的目的。因此，ROCK激酶抑制剂制备的药物，能够用于抑制肿瘤免疫逃逸或增强肿瘤免疫。