[发明专利]一种土鳖虫多糖的结构及其用途

说明书

本发明涉及一种土鳖虫多糖的结构及其用途，利用化学分析和波谱技术对其结构进行鉴定，发现本发明中的ESPS的重复单元结构中主链主要由→4)‑α‑D‑Glcp‑(1→的葡萄糖和→3)‑Galp‑(1→的半乳糖组成，且支链通过葡萄糖的O‑6键、半乳糖的O‑4键和O‑6键连接在主链上，即ESPS为首次从土鳖虫中分离得到的一种结构新颖的杂多糖。同时，本发明中的ESPS可刺激脾淋巴细胞的增殖，也可促进淋巴细胞及NK细胞对多种肿瘤细胞的杀伤作用，表明多糖ESPS具有促进免疫和抗肿瘤作用。

技术领域

本发明涉及一种动物中药材中化合物，具体是由→4)-α-D-Glcp-(1→的葡萄糖和→3)-Galp-(1→的半乳糖组成的葡萄半乳聚糖主链结构的土鳖虫多糖(ESPS)以及用途。

背景技术

土鳖虫多糖是从传统中药材土鳖虫中提取出的一种天然动物多糖。据《本草纲目》记载土鳖虫具有破血淤，散坚结，解凝治血，接骨续筋，消肿止痛等功能。近年研究结果表明，土鳖虫不仅是一种珍贵的中药材，而且还含有抗凝血，抗肿瘤等多种活性天然成分。

多糖作为生物体的主要组成成分，广泛存在于动物，植物，微生物，是自然界含量最多的高分子聚合物。随着医药学以及细胞生物学技术发展，近年来研究者们不断对多糖进行深入研究。多糖具有多种生物活性，但对细胞组织毒性甚微，因而展现出非常广阔的发展前景。近年来对多糖的研究主要集中在其免疫活性及抗肿瘤活性，也有研究致力于多糖降血糖，降血脂，抗氧化，抗病毒等多种生物活性。多糖作为免疫治疗药物其作用机制主要集中于多糖能够促进相关免疫细胞因子分泌，激活T细胞，自然杀伤(NK)细胞，树突状细胞(DC)等相关免疫细胞，提高宿主免疫力以达到间接抗肿瘤作用。目前国内外已批准临床应用的多糖有香菇多糖、云芝多糖等，多糖的研究范围主要集中在其结构表征和生物功能，并将其应用于医药行业。随着对多糖构效关系的逐步深入探究，旨在发现具有良好生物学活性的新型多糖，多糖化合物的生物学活性研究得以迅速发展。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种土鳖虫多糖，为首次从土鳖虫中分离到的杂多糖。本发明另一个目的是提供该多糖的提取方法。本发明还有一个目的是指出该多糖具有显著的免疫增强和抗肿瘤活性，尤其对于肝癌和胰腺癌有良好的治疗作用，可以制备成相关药物。

技术方案：本发明所述土鳖虫多糖，其特征在于由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖组成，摩尔比为7.4:3.1:13.9:9.3:39.7:26.5；相对分子量为2.14×10⁴Da；具有葡萄半乳聚糖主链结构，其重复单元的结构中主链由→4)-α-D-Glcp-(1→的葡萄糖和→3)-Galp-(1→的半乳糖组成，支链通过葡萄糖的O-6键，半乳糖的O-4键和O-6键连接在主链上，所述的主链单元结构及支链片段如图12所示。

所述的土鳖虫多糖含有吡喃糖环。

所述的土鳖虫多糖，通过以下方法制备：

1.分离步骤：土鳖虫粉末经过水抽提、除蛋白、乙醇沉淀；

2.纯化步骤：

(1)取经水提，Sevag试剂联合木瓜蛋白酶除蛋白，醇沉制得的土鳖虫多糖粗品，充分溶解于去离子水，用已平衡好的离子交换柱Cellulose DE-52进行多糖粗品的洗脱；

(2)将离子交换柱分离所得土鳖虫多糖水洗组分用Sephacryl S-300分子筛柱凝胶层析，以去离子水洗脱，分部收集，硫酸苯酚法跟踪检测，合并相同组分；冷冻干燥，得到土鳖虫多糖。

所述土鳖虫多糖的提取方法，包括分离和纯化，分离是将土鳖虫粉末经过水抽提、除蛋白、乙醇沉淀步骤，其特征在于纯化使用柱层析方法，具体包括下列步骤：

(1)取经水提，Sevag试剂联合木瓜蛋白酶除蛋白，醇沉制得的土鳖虫多糖粗品，充分溶解于去离子水，用已平衡好的离子交换柱Cellulose DE-52进行多糖粗品的洗脱；