[发明专利]一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法

说明书

本发明公开了一种液体饮料中β‑羟基‑β‑甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法。该方法采用高效液相色谱‑串联质谱对液体饮料中β‑羟基‑β‑甲基丁酸进行测定和确证；通过换算系数和已测定的β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量，换算得到液体饮料中β‑羟基‑β‑甲基丁酸钙盐的含量。该方法包括液体饮料中β‑羟基‑β‑甲基丁酸测定的样品前处理步骤，空白试验方法，高效液相色谱‑串联质谱的测定和确证步骤，以及液体饮料中β‑羟基‑β‑甲基丁酸钙盐的换算方法。本发明提供的液体饮料中β‑羟基‑β‑甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法，具有色谱保留和线性关系好、样品前处理较简单、回收率和准确度高等优点，可广泛应用于液体饮料样品中β‑羟基‑β‑甲基丁酸及其钙盐成分的定量检测和掺假判别。

技术领域

本发明涉及食品和保健品质量分析领域，尤其涉及一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法。

背景技术

β-羟基-β-甲基丁酸(CAS:625-08-1)是必需氨基酸亮氨酸在体内通过其代谢产物α-酮异己酸产生的一种衍生物。必需氨基酸亮氨酸无法在人体内自行合成，一般通过饮食从外界摄取，人体内的亮氨酸除了被用于蛋白合成外，少量的亮氨酸经代谢后能产生少量的β-羟基-β-甲基丁酸，在正常饮食条件下，成年人体一般每天能产生约200～400mgβ-羟基-β-甲基丁酸。由于β-羟基-β-甲基丁酸对人体具有增加肌肉合成，减少肌肉分解，减少脂肪，增长瘦体重，改善肌肉质量、肌肉力量和躯体功能的作用，并可以用于肌少症的营养干预，近年来备受众多医学专家和营养专家的关注，以及健身职业运动员的青睐。

在商业化生产中，为了便于储存和使用，合成时通常将β-羟基-β-甲基丁酸转化成β-羟基-β-甲基丁酸钙盐的形式，β-羟基-β-甲基丁酸钙为粉末状物质，溶于水，并且稳定性较好。原卫生部2011年1号公告批准β-羟基-β-甲基丁酸钙作为新资源食品，使用范围为运动营养食品、特殊医学用途配方食品；2017年5月国家卫生计生委发布公告，由于β-羟基-β-甲基丁酸钙的安全性评估材料审查并通过，故扩大β-羟基-β-甲基丁酸钙的使用范围到液体饮料类、乳及乳制品、可可制品、巧克力和巧克力制品以及糖果、烘焙食品。随着使用范围的大幅扩增，β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐在包括液体饮料在内的多种产品中，将具有十分广阔的应用前景。

当前，国内外有关食品中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的检测，未见液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐含量的检测方法，但已有液相色谱紫外法(HPLC-UV)检测大豆肽蛋白质粉中β-羟基-β-甲基丁酸的含量的报道。由于单纯的HPLC-UV检测法是一种非确证检测方法，无法对目标化合物进行定性确证，进而影响样品检测结果是否含有β-羟基-β-甲基丁酸的确证判断。本发明旨在建立一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定和确证方法，考虑到已有的大豆肽蛋白质粉样品检测所用的HPLC-UV法中的磷酸盐流动相体系和质谱不兼容，以及液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐含量的检测未见报道的现状，本发明通过优化色谱柱类型、与质谱兼容的流动相，以及样品前处理方法等，建立一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定和确证方法。所建立的方法在灵敏度、抗干扰能力以及目标化合物的确证方面具有明显的优势，并且具有色谱保留和线性关系好、样品前处理较简单、回收率和准确度高等优点，可广泛应用于液体饮料样品中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐成分的定量检测和掺假判别。

发明内容

为了解决液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐无对应的测定和确证方法的难题，本发明的目的是提供一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法，该方法具有色谱保留和线性关系好、样品前处理较简单、回收率和准确度高，能定性确证等优点。

为了实现上述目的，本发明提供一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法，包括以下步骤：

(1)对不含和含二氧化碳液体饮料样品的前处理；