[发明专利]一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法

权利要求书

1.一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法，其特征在于该检测方法包括以下的步骤：

(1)对不含和含二氧化碳液体饮料样品的前处理；

(2)空白试验：除未添加液体饮料样品外，其他均按照步骤(1)方法处理后得到的样品；

(3)高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定和确证β-羟基-β-甲基丁酸；

(4)液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸钙盐含量的换算。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，不含二氧化碳液体饮料样品的前处理步骤为：称取1～5g均匀试样至50mL容量瓶中，添加约25mL 0.1％甲酸甲醇溶液混匀后，超声提取10min，冷却至室温后用0.1％甲酸甲醇溶液定容至刻度混匀。将容量瓶中适量液体转移至塑料离心管中，以≥10 000rpm的速度离心5min，将上清液转移至进样瓶中，待测。如上清液中的β-羟基-β-甲基丁酸浓度过大，并超校准曲线范围，应按照逐级稀释的原则，将上清液用0.1％甲酸甲醇溶液稀释后再进行测定。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，含二氧化碳液体饮料样品的前处理步骤为：转移适量液体试样至烧杯中，置于超声波清洗器中超声，直至烧杯中液体试样无气泡冒出，取出烧杯冷却至室温。称取1～5g均匀试样至50mL容量瓶中，添加约25mL0.1％甲酸甲醇溶液混匀后，超声提取10min，冷却至室温后用0.1％甲酸甲醇溶液定容至刻度混匀。将容量瓶中适量液体转移至塑料离心管中，以≥10 000rpm的速度离心5min，将上清液转移至进样瓶中，待测。如上清液中的β-羟基-β-甲基丁酸浓度过大，并超校准曲线范围，应按照逐级稀释的原则，将上清液用0.1％甲酸甲醇溶液稀释后再进行测定。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定β-羟基-β-甲基丁酸的条件如下：

色谱柱：极性端基封尾的C18固定相色谱柱(Synergy Hydro-RP色谱柱，250×4.6mm，4μm)或相当者；

梯度洗脱：流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱条件设定为：0～15.0min，10～50％B；15.0～15.1min，50～10％B；15.1～20min，10％B；

柱温箱温度：30℃；

进样量：10μL；

流速：0.8mL/min；

电喷雾离子源工作模式：负离子；

数据采集模式：多反应监测(MRM)模式；

MRM的特征母离子/子离子对：117.0/59.0和117.0/41.0；

帘气：40.0L/min；

碰撞气：中等(Medium)；

电喷雾离子源电压：-4500V；

温度(TEM)：550℃；

离子源气体1：70.0psi；

离子源气体2：70.0psi；

入口电压：-10.0V；

碰撞室出口电压：-13.0V；

测量方式：校准曲线外标法定量。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)确证β-羟基-β-甲基丁酸的方法如下：按照高效液相色谱-质谱条件对标准工作溶液和样液进行测定。如果样液中的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致，样液中目标化合物所选择的离子均出现，而且选择的离子丰度比与标准工作溶液的丰度比在允许偏差范围内，则可判断样液中存在β-羟基-β-甲基丁酸。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸钙盐含量的换算方法如下：根据液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸的测定结果，将试样中测得的β-羟基-β-甲基丁酸含量乘以对应的换算系数，可换算得到液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸钙盐或水合β-羟基-β-甲基丁酸钙盐的含量。