[发明专利]一种用于筛选细胞培养条件的标准方法

说明书

本发明公开了一种用于筛选细胞培养条件的标准方法，包括如下步骤：1)配制不同浓度的培养基，包括用无血清DMEM稀释的羊水培养基以及加了不同血清浓度的羊水培养基；2)采用步骤1)中两种羊水培养基接种相同浓度的细胞，连续观察2天以上，用显微镜拍照以及文字描述细胞状态；3)采用量化的评分标准对步骤2)所得细胞状态加以评分统计，将细胞的生长状态进行量化，比较细胞在不同培养基中生长状态质量的差异；4)根据步骤3)所得差异，得出培养基浓度、细胞浓度以及培养时间三者之间的最佳配比，即得。该标准方法评估结果更加可靠，可以减少病毒分离失败、避免延误临床诊治；可以满足不同细胞、不同时间的需要，减少试剂的浪费。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其是一种用于筛选细胞培养条件的标准方法。

背景技术

目前病毒分离培养仍然是病毒诊断的金标准。病毒是严格的细胞内寄生，因此临床病毒的分离培养需要用到大量的细胞。细胞质量的优劣关乎病毒分离的成败，因此，如何保证用来分离病毒的细胞的质量至关重要，然而如何评价细胞的质量水平，目前临床上并没有一套系统的评分标准，都是依靠实验者依靠显微镜下肉眼观察的主观评判，而由于实验者经验水平不一致而引起的人工误差，主观评判的结果会有很大的偏差，可能会使用细胞质量较差的细胞进行病毒分离培养而导致病毒分离的失败而出现假阴性结果。

为了保持细胞长期在体外培养的生长与形态的稳定，需要对细胞进行频繁、繁琐的传代工作，同时耗费大量的试剂。细胞的质量关乎病毒分离培养的成败。细胞的质量如何与许多因素相关，包括培养所用的试剂以及操作技术水平不稳定导致的人工误差等。然而，对于如何对细胞的质量水平进行评估，以确定细胞能否用于病毒分离培养，临床上还缺乏一套系统的评分标准。

此外，由于临床工作中存在的众多不确定性因素，细胞传代的时间间隔并不是一成不变的，传代时间从一天到三天不等，由于细胞生长存在接触性抑制、培养基中的营养物质是有限的，而细胞生长的空间是固定的，若不同的传代时间都用同样的细胞浓度、相同的培养基显然是不能符合细胞的生长需要，导致细胞质量的降低，进而造成试剂的浪费，同时给实验者增加不必要的工作负担。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种用于筛选细胞培养条件的标准方法，其评估结果更加可靠，可以减少临床上由于实验人员操作水平及临床经验的偏差而导致细胞培养水平不一，以及对细胞状态的评判不准确导致的病毒分离失败、造成假阴性和延误临床诊治；采用本发明的标准方法可以得出培养基浓度、细胞浓度以及培养时间三者之间的最佳配比，使得临床的工作更加灵活，可以满足不同细胞、不同时间的需要，减少试剂的浪费。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种用于筛选细胞培养条件的标准方法，包括如下步骤：

1)配制不同浓度的培养基，包括用无血清DMEM稀释的羊水培养基以及加了不同血清浓度的羊水培养基；

2)采用步骤1)中两种羊水培养基接种相同浓度的细胞，连续观察2天以上(优选3天以上)，用显微镜拍照以及文字描述细胞状态(此为传统的人工评判方法)；

3)采用量化的评分标准对步骤2)所得细胞状态加以评分统计，将细胞的生长状态进行量化(量化评分为本发明的发明点之一)，比较细胞在不同培养基中生长状态质量的差异；

4)根据步骤3)所得差异，得出培养基浓度、细胞浓度以及培养时间三者之间的最佳配比，即得。

在一些实施方案中，所述步骤2)中细胞为MDCK或HEp-2。需要说明的是，本发明的标准方法用于筛选细胞条件时，其中细胞包括但不限于MDCK或HEp-2，还可以是其它的动物细胞或植物细胞。