[发明专利]一种用于筛选细胞培养条件的标准方法

权利要求书

1.一种用于筛选细胞培养条件的标准方法，包括如下步骤：

1)配制不同浓度的培养基，包括用无血清DMEM稀释的羊水培养基以及加了不同血清浓度的羊水培养基；

2)采用步骤1)中两种羊水培养基接种相同浓度的细胞，连续观察2天以上，用显微镜拍照以及文字描述细胞状态；

3)采用量化的评分标准对步骤2)所得细胞状态加以评分统计，将细胞的生长状态进行量化，比较细胞在不同培养基中生长状态质量的差异；

4)根据步骤3)所得差异，得出培养基浓度、细胞浓度以及培养时间三者之间的最佳配比，即得。

2.权利要求1的标准方法，其中，所述步骤2)中细胞为MDCK或HEp-2。

3.权利要求1的标准方法，其中，所述步骤3)中评分标准包括死亡细胞百分比、细胞内核仁可见程度、胞间颗粒百分比和细胞边缘情况。

4.权利要求3的标准方法，其中，所述死亡细胞百分比细分为10个等级，包括小于或等于5％、5～9％、10～19％、20～29％、30～39％、10～49％、50～59％、60～69％、70～89％和大于或等于90％；所述胞间颗粒百分比细分为5个等级，包括小于或等于5％、5～29％、30～59％、60～89％和大于或等于90％。

5.权利要求1的标准方法，其中，所述细胞内核仁可见程度细分为5个等级，包括小于或等于9％、10～29％、30～59％、60～89％和大于或等于90％；所述细胞边缘情况细分为5个等级，包括清晰锐利、尚清晰锐利、稍圆钝、圆钝和不清。

6.权利要求1或3的标准方法，其中，所述评分标准如说明书中表1所示。

7.权利要求1的标准方法，其中，所述接种的细胞浓度为1～3×10⁵个/mL。

8.权利要求1的标准方法，其还包括对步骤3)中评分标准可信度的验证：通过测定细胞的吸光度，以羊水培养基组细胞的吸光度作为基线对照，其余组细胞吸光度值与羊水培养基组的吸光度相比，计算细胞的增殖活力，比较自建评分标准计算所得的结果与基于测定的吸光度所算得的细胞增值活力结果的一致性。

9.权利要求8的标准方法，其中采用CCK8测定细胞的吸光度。

10.一种培养细胞的方法，其中，当细胞为MDCK时，铺板浓度为3×10⁵个/mL，若铺板第二天需用细胞，则用羊水培养基培养MDCK，若铺板第三天使用细胞，则用含4％血清的羊水培养基培养MDCK；

当细胞为HEp-2时，铺板浓度为1×10⁵个/mL，若铺板第二天需用细胞，则用无血清DMEM稀释过的羊水培养基培养HEp-2，若铺板第三天使用细胞，则用含4％血清的羊水培养基培养HEp-2。