[发明专利]一种定点突变的载体蛋白及其在制备疫苗中的用途

权利要求书

1.一种定点突变的载体蛋白，其特征在于，其中所述载体蛋白上1个位点上的氨基酸被突变为非天然氨基酸，所述的非天然氨基酸为赖氨酸衍生物，所述的非天然氨基酸为

，所述的载体蛋白选自如SEQ ID NO:2所示的融合蛋白HIN47-HID或如SEQ ID NO:3所示的融合蛋白HID-HIN47，所述HIN47-HID融合蛋白的突变位点选自：示于SEQ ID NO:2的序列的第174R位、217I位、223N位、226I位、313R位、315K位、522K位、557D位、653E位或684Y位，所述HID-HIN47蛋白的突变位点选自：示于SEQ ID NO：3的序列的第78K位、113D位、209E位、240Y位、527R位、570I位、576N位、579I位、666R位或668K位。

2.如权利要求1所述定点突变的载体蛋白，其特征在于，突变前蛋白氨基酸序列的第N位氨基酸被突变为Lys-azido，所述突变氨基酸的连接方式如下式所示：

，

其中，所述的N为突变位点，AA为突变位点前后的氨基酸，R₁为。

3.一种定点突变的载体蛋白的偶联物，其特征在于，所述的偶联物为权利要求1-2任意一项所述的定点突变的载体蛋白与含有或修饰炔基端基的糖、核酸、氨基酸、多肽或小分子化合物制备得到。

4.如权利要求3所述的定点突变的载体蛋白的偶联物，其特征在于，突变前蛋白氨基酸序列的第N位氨基酸被突变为如下结构：

，或者，

其中，

N为突变位点，AA为突变位点前后的氨基酸，

R₂为糖、核酸、氨基酸、多肽或羧基端修饰基团。

5.如权利要求3或4所述的定点突变的载体蛋白的偶联物，其特征在于，所述的偶联物为糖缀合物，所述的糖缀合物为权利要求1-2任意一项所述的定点突变的载体蛋白与含有或修饰有炔基端基的多糖缀合。

6.如权利要求5所述的定点突变的载体蛋白的偶联物，其特征在于，其中所述糖缀合物中糖:载体蛋白的比率（w/w）为0.3至3。

7.如权利要求5所述的定点突变的载体蛋白的偶联物，其特征在于，其中所述多糖的每10至50个糖重复单元，在所述载体蛋白与所述多糖之间存在至少一个共价键。

8.一种免疫原性组合物，其特征在于，其中包含权利要求5-7中任一项所述的糖缀合物以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

9.如权利要求8所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述的糖缀合物为荚膜多糖的糖缀合物，所述荚膜多糖选自肺炎球菌，血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F或33F中的一种或两种以上的组合。

10.一种肺炎多价结合疫苗，其特征在于：所述肺炎多价结合疫苗为多价肺炎球菌多糖与两种或两种以上的权利要求1-2任意一项所述的定点突变的载体蛋白形成。

11.权利要求1-2任意一项所述的定点突变的载体蛋白、权利要求3-7任一项所述的定点突变的载体蛋白的偶联物，或权利要求8-9任意一项所述的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途。

12.权利要求11所述的用途，其中所述的疫苗为流感疫苗或肺炎疫苗。