[发明专利]一种于体外长期维持肝细胞功能的培养体系及成熟肝细胞的长期体外培养方法

权利要求书

1.一种于体外长期维持肝细胞功能的培养体系，其特征在于，由如下组分构成：DMEM/F12液体基础培养基、0-5×B27添加剂、0-5×N2 添加剂、1%青链霉素/链霉素、2-100 mM尼克酰胺、10-1000μM地塞米松、60-500 μg/mL维生素C、1-10μM Latrunculin B、5-50μMBlebbistatin、0-50μM Dasatinib、0-500μM XAV939和0-10000μM的LY294002。

2.根据权利要求1所述的于体外长期维持肝细胞功能的培养体系，其特征在于：

其中，尼克酰胺的浓度为2 mM，地塞米松的浓度为10μM，维生素C的浓度为60 μg /mL，Latrunculin B的浓度为1 μM，Blebbistatin的浓度为5 μM，Dasatinib的浓度为0.2 μM，XAV939的浓度为2 μM，LY294002的浓度为5 μM。

3.采用权利要求1~2任一项所述的培养体系进行成熟肝细胞长期体外培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、采用含有1%基质胶的DMEM/F12培养基预先包被培养支持物，并于4℃保存过夜；

B、采用含有1%基质胶的培养体系将刚从肝脏中分离的肝细胞种植于预先包被的所述培养支持物上，4~6小时后采用该含有1%基质胶的培养体系换液去除未贴壁细胞，之后均采用该含有1%基质胶的培养体系每天换液，直至第三天，三天后更换为不含基质胶的培养体系进行换液，直至三周。

4.权利要求3所述的成熟肝细胞长期体外培养方法，其特征在于：

其中，所述成熟肝细胞为哺乳动物的成熟肝细胞。

5.根据权利要求3所述的成熟肝细胞长期体外培养方法，其特征在于：

其中，所述成熟肝细胞为小鼠、大鼠或人的成熟肝细胞。