[发明专利]一种肺硬度基底体外细胞培养平台的制备方法

权利要求书

1.一种肺硬度基底体外细胞培养平台的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1)将鼠尾I型胶原和DMEM基础培养基分别按不同体积比混合，置于第一多孔板中，所述的鼠尾I型胶原的终浓度范围在170-1790ug/mL之间；

2)将鼠尾I型胶原、DMEM基础培养液及LOXL2过表达肝癌细胞无血清培养上清CM-LV-LOXL2-OE按1：10：5体积比混合，置于第二多孔板中；

3)将步骤1）和2）的上述第一多孔板和第二多孔板放入 37℃温箱静置1~2小时；

4)将步骤3）成胶后的基底置于4℃冰箱中10~14h，形成不同基底硬度体外细胞培养平台。

2.根据权利要求1所述的一种肺硬度基底体外细胞培养平台的制备方法，其特征在于：步骤1）中，所述的鼠尾I型胶原和DMEM基础培养基分别按1：1，1：2，1：3，1：4，1：15或者1：20系列体积比混合，置于第一多孔板中。

3.根据权利要求1所述的一种肺硬度基底体外细胞培养平台的制备方法，其特征在于：步骤2）中，所述的鼠尾I型胶原的终浓度为223.75ug/mL；所述的LOXL2的终浓度为96.875ng/mL。

4.根据权利要求1所述的一种肺硬度基底体外细胞培养平台的制备方法，其特征在于：可以采用物性测试仪对步骤4）每孔所成凝胶硬度进行检测，检测所设参数为：Pre-TestSpeed:1.00mm/sec；Test Speed:0.50 mm/sec；Target Mode: Strain； Strain:90%；Trigger Force:1.0/2.0g。

5.根据权利要求1所述的一种肺硬度基底体外细胞培养平台的制备方法，其特征在于：所述的CM-LV-LOXL2-OE的制备方法如下：采用慢病毒介导过表达技术形成慢病毒包装LOXL2过表达质粒，感染肝癌细胞MHCC97H，先以含3 ug/mL嘌呤霉素、体积百分比浓度10%的FBS和体积百分比浓度1%的青链霉素的DMEM培养液进行感染细胞阳性筛选，至细胞无明显死亡，再用含体积百分比浓度10% FBS和体积百分比浓度为1%青链霉素的DMEM换液培养，细胞生长至85~95%密度，收集细胞确定LOXL2过表达程度，随后将85~95%密度LOXL2过表达肝癌细胞以DMEM无血清培养液培养24小时，收取培养上清，获得CM-LV-LOXL2-OE，离心后分装冻存。