[发明专利]一种肝脏干细胞的分离培养方法在审
| 申请号： | 201910947258.5 | 申请日： | 2019-10-08 |
| 公开（公告）号： | CN110724663A | 公开（公告）日： | 2020-01-24 |
| 发明（设计）人： | 王克强 | 申请（专利权）人： | 王克强 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 35101 厦门原创专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 何玲君 |
| 地址： | 010020 内蒙古自治区*** | 国省代码： | 内蒙;15 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肝脏干细胞 肝脏 分离培养 灌流液 培养液 胶原酶溶液 离体肝脏 温度降低 保存液 缓冲液 清洗液 悬液 成功率 冲洗 浸泡 清洗 消化 改进 开放 | ||
1.一种肝脏干细胞的分离培养方法，其特征在于包括以下步骤：
A、向离体肝脏注入3～5℃的保存液，使肝脏在30min内温度降低至15℃一下；
B、使用缓冲液对肝脏进行冲洗20～30min；
C、向肝脏开放注入灌流液，灌流液的温度为37℃，注入流速为200～300mL/min，持续2～3min；
D、使用胶原酶溶液对肝脏进行浸泡消化45～60min；
E、使用清洗液对肝脏进行清洗，获得肝脏干细胞悬液，离心获得肝脏干细胞；
F、将获得的肝脏干细胞接入培养液进行培养，培养温度为37℃，培养时间为24～36h。
2.根据权利要求1所述的肝脏干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤A中，保存液采用UW液。
3.根据权利要求1所述的肝脏干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤B中，缓冲液包括以下组分，
0.35wt%的KCl、0.1wt%的CaCl2、0.55wt%的NaHCO3、0.15wt%的Na2HPO4·2H2O，余量为水。
4.根据权利要求1所述的肝脏干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤C中，灌流液包括以下组分，
0.03wt%的KCl、0.01wt%的庆大霉素、0.02wt%的青霉素、0.05wt%的HEPES、0.75wt%的NaCl，余量为水。
5.根据权利要求1所述的肝脏干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤D中，胶原酶溶液包括以下组分，
0.3wt%的Ⅱ型胶原酶、0.1wt%的KH2PO4、0.05wt%的MgSO4·7H2O、1.5wt%的葡萄糖，余量为水；
配置完成后，通过添加柠檬酸使胶原酶溶液的pH值达到6.5～6.8。
6.根据权利要求1所述的肝脏干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤E中，清洗液包括以下组分，
0.55wt%的KH2PO4、0.15wt%的MgCl2、2.5wt%的双抗、0.05wt%的HEPES，，余量为水。
7.根据权利要求1所述的肝脏干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤F中，培养液包括以下组分，
0.1wt%的地塞米松、0.05wt%的尼克酰胺、0.85wt%的D半乳糖、0.03wt%的双抗、0.25wt%的胰岛素，余量为Ultroser G培养液。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于王克强，未经王克强许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910947258.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
