[发明专利]一种高效樱花组培快繁的方法

说明书

本发明公开了一种高效樱花组培快繁的方法，包括无菌苗的获得、无菌苗的诱导培养、无菌苗继代培养、生根培养、炼苗与移栽等步骤，通过多个步骤的合理搭配以及培养基的配方选择，简化了樱花的生产流程，降低了生产的成本，通过本发明所繁育的樱花成活率高、成长周期短，且本发明的方法步骤简单，培养成本低，具有较高的商用价值及实用性，适合市场推广。

技术领域

本发明专利涉及植物组织培养技术领域，具体指一种高效樱花组培快繁的方法。

背景技术

樱花作为观赏性花木受到大众的广泛喜爱，樱花是蔷薇科樱属几种植物的统称，在《中国植物志》新修订的名称中专指“东京樱花”，亦称“日本樱花”。樱花品种相当繁多，数目超过三百种以上，全世界共有野生樱花约150种，中国有50多种。全世界约40种樱花类植物野生种祖先中，原产于中国的有33种。其他的则是通过园艺杂交所衍生得到的品种。樱花为温带、亚热带树种，性喜阳光和温暖湿润的气候条件，有一定抗寒能力。对土壤的要求不严，宜在疏松肥沃、排水良好的砂质壤土生长，但不耐盐碱土。根系较浅，忌积水低洼地。有一定的耐寒和耐旱力，但对烟及风抗力弱，因此不宜种植有台风的沿海地带。

樱花种子自然条件下不易萌发，传统的扦插、嫁接方法繁育系数低，成苗慢。随着樱花在园林绿化中的广泛应用，市场对樱花苗木需求量增加。因此传统的繁殖方法已经远远不能满足市场化需要。组织培养不仅可以增加繁育系数、成苗时间周期短的特点，而且还能够保持亲本的优良性状，为樱花的快速繁殖和工厂化育苗提供了一条切实可行的方法。在现有的组织快繁技术中，樱花外植体的污染率高，外植体萌芽率30％-40％，增殖系数1-3，生根率不足50％，较低的成活率严重制约了樱花在城市绿化及园林建设中的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效樱花组培快繁的方法，进行工厂化生产以满足市场的需求，解决目前市面上常规樱花组织培养和快速繁殖方法外植体污染率高、萌芽率低、增殖系数小、生根率低的问题。

为了解决上述问题，本发明提供了一种高效樱花组培快繁的方法，包括以下步骤：

(1)无菌苗的获得：剪取健康粗壮、无病害和虫害是一年生樱花幼嫩枝条进行清洗、去叶片，将含有腋芽的枝条剪为长度3-5厘米；先使用流水清洗枝条1-2小时，后将枝条浸泡至1-2％的洗衣粉5-10分钟，再使用流水清洗枝条1-2小时；在无菌环境下对枝条进行灭菌之后用吸水纸吸干多余的水分，将枝条切成带一个腋芽的茎段即完成无菌苗获得的处理；

(2)无菌苗的诱导培养：将步骤(1)处理后带有腋芽的茎段接种于培养基中进行光培养，2周后腋芽开始萌动，形成小芽，茎段外植体萌芽率在80％以上；所述培养基成分为：MS+6-BA(6-苄氨基嘌呤)0.5-1.0mg/L+NAA(萘乙酸)0.1-0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L；

(3)无菌苗继代培养：将步骤(2)处理后腋芽萌动形成的小芽转接至增殖培养基上进行增殖继代培养，4～5周后形成丛生芽；所述增殖培养基成分为：MS+6-BA 0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L；

(4)生根培养：先将步骤(3)处理后丛生芽切割的高度大于2cm的樱花组培苗保留3-4片展开叶，再基部叶片和叶柄切除干净，最后接种到生根培养基中；所述生根培养基为：1/2MS+IBA(吲哚丁酸)0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L；

(5)炼苗与移栽：常温炼苗3～6天后，移栽入基质中培养4～5周，获得樱花的快速繁殖苗。

作为优选的方案，所述步骤(1)中，在无菌环境下进行灭菌的具体步骤为：将枝条置于无菌操作台上用70％的酒精浸泡20～30s，之后用无菌水冲洗3～5次，再用1％次氯酸钠浸泡10-15分钟，最后再使用无菌水冲洗3～5次；