[发明专利]一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法

权利要求书

1.一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法，其是通过生物对密码子的偏好性，胞内翻译过程中个别密码子利用频率和其对应的tRNA在宿主胞内浓度较低，将代谢途径基因中的氨基酸密码子替换成其稀有形式，实现翻译水平的基因表达调控。

2.根据权利要求所述一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法，其特征在于采用如下步骤：

A.需要确定所用菌株和所需调控的基因，确定所用菌株的密码子偏好性。

B.根据氨基酸密码子偏好性和调控基因序列，确定选用的氨基酸和其稀有密码子，将所需调控基因中的相应氨基酸的密码子替换为对应的稀有密码子，使用PCR方法重新人工合成此序列；

C.将步骤2中人工合成的基因序列与质粒载体连接，将连接产物化转至感受态细胞中，经过PCR验证，挑选正确的单菌落，保存菌液，提取质粒；

D.将步骤3中得到的含正确质粒的菌株涂于平板上培养；

E.挑取单菌落接入培养基中，加入相应的氨基酸，检测调控基因表达量和菌体浓度。

3.如权利要求1或2所述的一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法，其特征在于步骤(A)中，所述稀有密码子为相对于菌株、可以将氨基酸插入到肽链中的任何密码子，范围适用于所有微生物。

4.如权利要求1或2所述的一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法，其特征在于步骤(B)中，所述合成基因包括各生物的代谢途径基因、微生物必需基因。

5.如权利要求1或2所述的一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法，其特征在于步骤(E)中，加入的氨基酸为特定微生物中具有稀有密码子形式的某氨基酸。