[发明专利]曼氏无针乌贼维甲酸X受体基因的克隆和表达

说明书

本发明提供一种曼氏无针乌贼维甲酸X受体基因的克隆和表达，属于基因工程技术领域，采用RACE技术克隆获得了曼氏无针乌贼维甲酸X受体基因的CDS区核苷酸序列，如SEQ ID NO:1所示，全长1239bp，编码一个由412个氨基酸组成的蛋白质，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。采用荧光定量RT‑PCR技术分析维甲酸X受体基因在在幼年期、性腺发育成熟产卵前期、产卵中期、产卵后濒死期的的如下组织中均有表达：肌肉、胃、心脏、肠、表皮，鳃、脑、胰、肝、视叶和视腺。本发明维甲酸X受体基因或其编码的蛋白质可用于曼氏无针乌贼的抗衰老中。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种曼氏无针乌贼维甲酸X受体基因的克隆和表达。

背景技术

核受体超家族具有调控胚胎的健康发育、内环境稳定以及保持生理稳态的作用。维甲酸X受体(retinoid X receptor，RXR)具有典型的核受体结构，作为配体依赖型转录因子在生物个体发育、细胞分化、新陈代谢和细胞凋亡中发挥重要作用。与其他核受体类似，维甲酸X受体分为A/B、C、D、E和F 5个不同的结构区域，其中，A/B区含有一个本身有活性的配体非依赖性的转录激活域(AF1)，与基因的表达调控有关；C区最为保守，也称为DNA结合区(DNA Binding Domain，DBD)；D区或称铰链区，连接C和E区；E区为配体结合区(LigandBinding Domain，LBD)，该区含一个配体依赖性的转录激活域(AF2)，在转录调节中起着非常重要的作用；F区与受体稳定性及抗原性有关。

曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)属于软体动物门、头足纲、十腕目、乌贼科、无针乌贼属，在浙江省历史上达到最高年产量6000吨，占当时全省海洋捕捞产量的近10％，各方面价值颇高。养殖的乌贼一年甚至可以繁殖两次，在3～5月与9～11月，6个月的时间可生长达200g，商品价值很高，在我国现在海水养殖品种中，它的潜力不容小觑。但与普通鱼虾类相比，它的怀卵量明显不高，平均怀卵量都不到2000粒，产卵量只有40％，由于产完卵就死亡的特性，当亲本死亡时，体内还残留了大量来不及产出的卵，这造成了很大浪费，给养殖户造成了直接的经济损失。研究表明RXR与曼氏无针乌贼的生理调控密切相关，虽然到目前为止人们对的曼氏无针乌贼基本功能有了一定的了解，但的在曼氏无针乌贼生长和产卵中的作用机制尚不明确，许多工作仍需开展。为了分析RXR在曼氏无针乌贼生长和产卵过程中的作用与调节机制，从分子水平出发探究RXR基因在发育、生殖、衰老过程中的表达显得尤为必要。这为可促进曼氏无针乌贼生长和繁殖方面的研究，进一步阐明的生理功能，丰富和完善曼氏无针乌贼内分泌的调控理论，解决养殖中所遇到的与生理学相关的难题提供基础理论依据，为养殖业带来更多效益。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种曼氏无针乌贼维甲酸X受体基因。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：曼氏无针乌贼维甲酸X受体基因，其CDS区核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明的又一目的，在于提供一种上述曼氏无针乌贼维甲酸X受体基因的克隆方法，包括：

从组织样品中提取总RNA，然后将提取的总RNA反转录成cDNA第一链；

以cDNA为模板进行PCR扩增，然后纯化PCR产物；

采用RACE技术获得如SEQ ID NO:1所示的曼氏无针乌贼维甲酸X受体基因的CDS区核苷酸序列。

其中，上述PCR扩增用引物为：SjRXR-F：5′-ATGGCGCATCTGTCTCGCAC-3′；SjRXR-R：5′-GCACGTAGCTGGCTCGTGAG-3′。

上述PCR扩增的反应体系为：2×Es Taq Master Mix 10μL，上下游引物各0.8μL，cDNA 200ng，ddH₂O补足至20μL。