[发明专利]一种白芨多糖的制备方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种白芨多糖的制备方法。该制备方法包括以下步骤：白芨块根干燥、粉碎，过筛；将白芨粉末加入已配制的低分子醇/盐双水相体系溶液，微波辅助萃取，高速离心分离出下相，超滤浓缩除盐后冷冻干燥，得白芨多糖。与现有技术相比，本方法可有效缩短提取时间、提高萃取纯度和减少提取步骤，且操作简便，易于工业规模制备。制备的白芨多糖结构完整，多糖收率高，蛋白去除率高，低毒安全，能够预防皮肤屏障的损伤，促进皮肤屏障损伤的修复进程，对皮肤屏障功能异常的敏感皮肤具有良好的抗敏作用。

【技术领域】

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种白芨多糖的制备方法。

【背景技术】

白芨为兰科多年生草本植物白芨Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎，常见于荫蔽草丛或林下潮湿地，因其根色白而连生，故名之，在我国各地均有分布。《中国药典》收载白芨的入药部位为块茎，其主要药效成分为白芨多糖，又称白芨胶、白芨甘露聚糖。研究表明干燥的鳞茎组织中含量约为40％～50％，这些多糖主要由β-1,4-甘露糖、β-1,4-葡萄糖和β-1,6-葡萄糖残基组成，属中性杂多糖，白芨多糖主要分子量跨度很大，其分子量范围从几万到几百万不等。现代药理研究表明，白芨多糖具有抗炎、促凝血、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等生物学活性；作为天然高分子材料，同时，白芨多糖具较好的组织相容性、生物黏附性、生物降解性、对黏膜无刺激性，且资源丰富、廉价易得，具有生物黏附载体材料的特性。

现有白芨多糖的提取方法有：水提法、水提醇沉法、连续逆流提取法和酶法。单一的水提法经过高温处理，此过程往往会造成白芨药材中淀粉会随多糖同时溶出，从而造成所制备的白芨多糖中含有大量的淀粉；而酶法在制备过程中虽然不会有淀粉等非活性多糖溶出，但在提取过程中又同时引入了蛋白质等杂质，而蛋白质和淀粉都是大分子结构在后期的纯化过程中很难除去，从而限制了白芨多糖的综合开发。此外，采用上述方法提取后需要结合 sevage法除蛋白质、乙醇沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和吸附层析等一种或多种方法对白芨多糖进行纯化，存在得率较低、试剂消耗量大、能耗高、价格昂贵、操作步骤繁琐等缺陷。

有鉴于此，研究出一种白芨多糖能够适合工业化生产、纯度好收率高的提取纯化方法是从业人员所迫切希望地。双水相萃取技术(Aqueous two- phase extraction,ATPS)又称水溶液两相分配技术，是近年来出现的引人注目，极有前途的新型分离技术，已经在生物化学、细胞生物学、生物化工等领域得到了较为广泛的应用。当生物物质或天然产物中的有效成分进入双水相体系时，由于表面性质、电荷作用和各种力(疏水键、氢键和离子键)的存在和环境因素(浓度、温度、pH值以及离子的种类和强度等)的影响，生物物质或天然产物中的有效成分易在两相间形成选择性的分配。尤其是低分子醇/盐双水相体系具有价廉、低毒、粘度较小等优势，可以用于天然产物的提取和分离。而目前关于双水相体系萃取白芨多糖的研究尚未见报道。为此，我们研究了低分子醇与不同无机盐如钾盐、钠盐和铵盐等的醇盐比及形成双水相体系的稳定性，建立了简单高效的白芨多糖制备方法，并将白芨多糖用于预防皮肤屏障的损伤，促进皮肤屏障损伤的修复。该方法通过微波辅助双水相技术将白芨多糖萃取物直接进入水层，同时将蛋白质等杂质萃取到上相或在两相界面，从而提高目标产物纯度，避免了现行工艺中有机溶剂的残留。该技术简单便捷，经济省时、绿色高效，便于放大。

【发明内容】

本发明解决的技术问题在于提供一种快速简便的白芨多糖制备方法，该方法白芨多糖提取率高，达到快速提取纯化目标产物的目的。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

一种白芨多糖的制备方法，具体包括如下操作步骤：

(1)白芨原料的处理：取白芨块根置于60℃-80℃温度下干燥至恒重，干燥块根经过粉碎、过筛，得到20目-80目白芨粉末；

(2)低分子醇/盐双水相体系的配制：室温下配制低分子醇与无机盐双水相体系，并调节溶液pH值为7.0～8.0，充分搅拌混匀，建立双水相体系；