[发明专利]一种佩奇虫壳菌发酵生产蛋白酶的培养基及方法

说明书

本发明公开了一种佩奇虫壳菌发酵生产蛋白酶的培养基及方法，培养基中的原料按重量分数计：木糖0.3‑2.4 wt.%、胰蛋白胨0.2‑1.6 wt.%、硫酸锰0.034‑0.27 wt.%、维生素B₁ 0.0005‑0.004 wt.%，初始pH值为7.4‑8.6。发酵方法：将佩奇虫壳菌接种于PDB液体培养基中制成种子液；取10 mL种子培养液接种于发酵生产蛋白酶的培养基中，于150 r/min、25℃条件下培养。本发明的发酵方法发酵周期短；条件温和，易于控制；提供的用于佩奇虫壳菌发酵生产蛋白酶的培养基，具有蛋白酶产率高，蛋白酶活力高等优点。

技术领域

本发明属于真菌的发酵培养领域，具体涉及一种佩奇虫壳菌发酵生产蛋白酶的培养基及方法。

背景技术

蛋白酶是通过分解肽键功能达到水解蛋白质的一类功能性酶。根据蛋白酶的作用模式和活性部位可将其分为8大类：天冬氨酸蛋白酶、天冬酰胺蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、苏氨酸蛋白酶及其他未知蛋白酶。

蛋白酶在真菌的生存和生命活动过程中具有重要作用，同时也是虫生真菌侵染寄主的重要毒力因子之一。在不同的病原性真菌中，蛋白酶作用也不同。宿主的黏附、定植和播散以及逃避宿主的免疫应答过程中有蛋白酶参与其中。

佩奇虫壳菌(Torrubiella petchii)属于虫草科(Cordycipitaceae)、虫壳属(Torrubiella)，其寄主为介壳虫或粉虱。迄今，中国对于佩奇虫壳菌的蛋白酶的功能性研究不多，我们采用佩奇虫壳菌，可以拓宽产蛋白酶的菌株资源。因此研究佩奇虫壳菌蛋白酶具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种佩奇虫壳菌发酵生产蛋白酶的培养基及方法，发酵周期短；条件温和，易于控制；培养基具有蛋白酶产率高，蛋白酶活力高等优点。

本发明采取的技术方案如下：

一种佩奇虫壳菌发酵生产蛋白酶的培养基，原料按重量分数计：木糖 0.3-2.4wt.%、胰蛋白胨 0.2-1.6 wt.%、硫酸锰 0.034-0.27 wt.%、维生素B₁ 0.0005-0.004 wt.%，初始 pH值为7.4-8.6。优选的，木糖6 g/L、胰蛋白胨16 g/L、硫酸锰2.7 g/L、维生素B₁0.01 g/L，初始 pH 值为7.8。

一种佩奇虫壳菌发酵生产蛋白酶的方法：将佩奇虫壳菌接种于PDB液体培养基中制成种子液；取10 mL种子培养液接种于发酵生产蛋白酶的培养基中，于150 r/min、25℃条件下培养。

本发明的有益效果在于：（1）方法：发酵周期短（只需要3天）；条件温和，易于控制；（2）培养基：具有蛋白酶产率高（提前2天达到最高酶活），蛋白酶活力高等优点。

附图说明

图1是不同碳源对佩奇虫壳菌蛋白酶活性的影响；

图2是不同氮源对佩奇虫壳菌产蛋白酶的影响；

图3是不同金属离子对佩奇虫壳菌蛋白酶活性的影响；

图4是不同pH对佩奇虫壳菌蛋白酶活性的影响；

图5是不同维生素对佩奇虫壳菌蛋白酶活性的影响；

图6是酪氨酸标准曲线。

具体实施方式

本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。

实施例1：单因素实验确定培养基最优成分