[发明专利]番茄遗传转化体系的构建方法

说明书

本申请公开一种番茄遗传转化体系的构建方法,其包括:获取无菌的番茄子叶；利用农杆菌侵染所述番茄子叶，其中，所述番茄子叶先在第一培养基上预培养1d；农杆菌侵染之后，将所述番茄子叶置于所述第一培养基上共培养1d；所述第一培养基在1/2MS培养基的基础上还包括2mg/L玉米素和0.5mg/L生长素；利用分化培养基诱导侵染后的番茄子叶依次分化愈伤组织和不定芽，以获得再生苗；利用生根培养基诱导所述再生苗生根；移植生根的再生苗到土中，以获得转基因番茄植株。本申请通过对各项因素及培养方式的筛选，特别是通过调整预培养和共培养的培养基配方，缩短了预培养和共培养的过程，建立了一种番茄快速遗传转化体系，该体系育苗周期短、转化率较高、操作简单。

技术领域

本申请涉及转基因技术领域，尤其涉及一种番茄遗传转化体系的构建方法。

背景技术

番茄属管状花目茄科(Solanaceae)番茄属(Lycopersicon)一年或多年生植物,是一种营养价值很高的蔬菜类经济作物，在我国南北方均有广泛种植。因为番茄具有完整的参考基因组序列，通过自花授粉，果实大，生长周期短，容易观察等特点，它也是研究浆果类果实发育与成熟的经典模式植物。

番茄作为具备良好加工特性的蔬菜，可以生食、煮食、加工为番茄酱、汁或整果罐藏，其普及性广，口感好，营养丰富，是植物口服疫苗的理想载体。目前，利用转基因植物生产口服疫苗愈加受到重视。番茄作为生物反应器来生产可食性疫苗具有较好的应用前景。

申请内容

本申请的目的是，针对现有番茄遗传转化存在的问题，提供一种育苗周期短、操作流程简单、转化率较高的番茄遗传转化体系的构建方法。

为达到以上技术目的，本申请采用的技术方案如下：

一种番茄遗传转化体系的构建方法,其包括以下步骤:

获取无菌的番茄子叶；

利用农杆菌侵染所述番茄子叶，其中，所述番茄子叶先在第一培养基上预培养1d；农杆菌侵染之后，将所述番茄子叶置于所述第一培养基上共培养1d；所述第一培养基在1/2MS培养基的基础上还包括2mg/L玉米素和0.5mg/L生长素；

利用分化培养基诱导侵染后的番茄子叶依次分化愈伤组织和不定芽，以获得再生苗；

利用生根培养基诱导所述再生苗生根；

移植生根的再生苗到土中，以获得转基因番茄植株。

优选地，所述获取无菌的番茄子叶的步骤为：

获取番茄种子，利用4％次氯酸钠在转速为120rpm的条件下消毒15min；

无菌水洗涤消毒后的番茄种子之后，继续在摇床上孵育至发芽；

将发芽的番茄种子播种到1/2MS培养基上，光下培养至番茄子叶展开；

收获无菌的番茄子叶。

进一步地，侵染所述番茄子叶之前，将所述番茄子叶切成0.5cm²的小块。

优选地，预培养时，所述番茄子叶正面朝下置于所述第一培养基上。

进一步优选地，预培养和共培养的过程，分别在避光的28℃的条件下进行。

优选地，农杆菌侵染过程中，所述农杆菌的浓度对应于该农杆菌在600nm波长处的吸光值达到0.5～0.8的范围内；侵染时间为15min。

优选地，所述分化培养基在1/2MS培养基的基础上还包括2mg/L玉米素、0.5mg/L生长素、250mg/L羧苄青霉素钠和50mg/L卡那霉素。

可选择地，所述分化培养基需10～15d更换一次，直至所述番茄子叶分化再生苗。