[发明专利]球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法

权利要求书

1.球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，包括：

将培养有球形孢子丝菌的培养基离心，收集菌株沉淀；

将菌株沉淀与裂解缓冲液混合，超声，离心，收集第一上清液；

将第一上清液与十六烷基三甲基溴化铵混合，静置，离心，收集第二上清液；

将第二上清液与硼酸混合，静置，离心，收集第三上清液；

将第三上清液过刀豆球蛋白亲和层析柱，洗脱，收集洗脱液。

2.如权利要求1所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，所述培养基的制备方法包括：

将蛋白胨、脱水小牛脑浸粉、脱水牛心浸粉、氯化钠、葡萄糖及磷酸氢二钠与蒸馏水混合，调节pH至7.4±0.2，灭菌。

3.如权利要求1所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，裂解缓冲液的成份包括十二烷基硫酸钠、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、乙二胺四乙酸，pH为8.0±0.5。

4.如权利要求1所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，将菌株沉淀与裂解缓冲液的混合液用80～120W的细胞破碎仪进行超声，超声时间10～50min。

5.如权利要求1所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，在将菌株沉淀与裂解缓冲液混合之前，用磷酸盐-吐温缓冲液洗涤菌株沉淀。

6.如权利要求5所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，磷酸盐-吐温缓冲液的制备方法包括：取磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾，加浓盐酸调pH至7.4，然后加入Tween 20。

7.如权利要求1所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，将第二上清液与硼酸混合，调pH至8.5，静置，离心，收集第三上清液，并将得到的沉淀用无水乙醇重悬，离心，收集上清，并合并入第三上清液。

8.如权利要求1所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，在过刀豆球蛋白亲和层析柱之前，用平衡缓冲液平衡刀豆球蛋白亲和层析柱；

平衡缓冲液的制备方法包括：取Tris碱、氯化钠、氯化锰和氯化钙，调节pH至7.4，加水。

9.如权利要求8所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，在过刀豆球蛋白亲和层析柱后，用平衡缓冲液冲洗，冲洗至流出液在280nm的紫外吸收不大于0.001。

10.如权利要求1所述的球形孢子丝菌胞壁抗原的提取方法，其特征在于，用α-D-甲基甘露糖苷溶液进行洗脱。