[发明专利]基于可视化BPE-ECL技术检测黄曲霉毒素B1的方法

权利要求书

1.基于可视化BPE-ECL技术检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）丝网印刷双极电极的制备，所述丝网印刷双极电极包括阴极端和阳极端；2）功能传感界面的构建：在步骤1）制备的丝网印刷双极电极的阴极端镀金后浸泡在巯基-聚乙二醇-羧基溶液里，室温密闭过夜；清洗后，将阴极浸泡在含有1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的混合溶液中；清洗后，在阴极端加入AFB1单克隆抗体构建功能传感界面；3）将已知浓度的AFB1标准品和固定浓度的HRP-AFB1混合后，与功能传感界面上的AFB1单克隆抗体作用，构建AFB1浓度与发光强度的标准曲线；4）将未知浓度的AFB1待测样品和固定浓度的HRP-AFB1混合后，与功能传感界面上的AFB1单克隆抗体作用，组装在功能传感界面上的HRP催化苯胺原位聚合生成聚苯胺；5）利用双极电极工作原理，检测丝网印刷双极电极阳极端的电致化学发光信号得到发光强度，利用已知AFB1浓度与发光强度的线性关系得出待测样品中AFB1的浓度。

2.根据权利要求1所述的基于可视化BPE-ECL技术检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤1）的丝网印刷双极电极的制备步骤如下：首先选用聚对苯二甲酸乙二醇酯电惰性材料为基底，然后在基底的两端印制两条工作电极引线得到基片；接着烘干基片，在两条工作电极引线中间印制碳电极并烘干，得到双极电极的阴极端和阳极端；再接着印制电极规范层并固化；最后采用印制电极绝缘层并固化即得。

3.根据权利要求2所述的基于可视化BPE-ECL技术检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤2）的功能传感界面的构建步骤具体如下：①在双极电极的阴极端加入含有氯金酸的PBS缓冲溶液，阳极端加入PBS缓冲溶液，通过电化学工作站给丝网印刷双极电极两端施扫描电压，随着氯金酸在双极电极的阴极端得电子，阴极端逐渐变黄，金纳米粒子沉积到阴极端，将制备好的双极电极用超纯水清洗干净，空气中干燥；②将上述双极电极的阴极端浸泡在巯基-聚乙二醇-羧基溶液里，室温密闭过夜；③PBS清洗后，将阴极浸泡在含有1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的混合溶液；④PBS清洗后，在阴极端加入AFB1单克隆抗体，室温下避光孵育即得。

4.根据权利要求1所述的基于可视化BPE-ECL技术检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤4）具体步骤如下：①将未知浓度的AFB1和100ngmL-1的HRP-AFB1混合液滴加在双极电极的阴极端，室温下避光孵育2h；②PBS清洗后，在阴极端加入醋酸/醋酸钠缓冲溶液室温下避光孵育2h。

5.根据权利要求4所述的基于可视化BPE-ECL技术检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述醋酸/醋酸钠缓冲溶液包括200mM苯胺、20mM过氧化氢，0.5μMDNA，pH4.3，所述DNA为A59，所述A59为59个碱基a的DNA。

6.根据权利要求1所述的基于可视化BPE-ECL技术检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤5）具体步骤为：在双极电极的阳极端加入共反应剂，利用双极电极工作原理，检测电致化学发光信号。

7.根据权利要求6所述的基于可视化BPE-ECL技术检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述共反应剂包括10mMRu(bpy)3(Cl)2·6H2O和50mMTPA。