[发明专利]一种用于小分子量蛋白质分离的聚丙烯酰胺凝胶及其制备方法有效
申请号: | 201910871754.7 | 申请日: | 2019-09-16 |
公开(公告)号: | CN110527017B | 公开(公告)日: | 2022-08-30 |
发明(设计)人: | 杨颂;王绪德;张高英 | 申请(专利权)人: | 武汉赛维尔生物科技有限公司 |
主分类号: | C08F220/56 | 分类号: | C08F220/56;C08F222/38;C08J3/075;C08K5/17;C08K5/053;C08K3/38;C07K1/26 |
代理公司: | 武汉天领众智专利代理事务所(普通合伙) 42300 | 代理人: | 林琳 |
地址: | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 分子量 蛋白质 分离 聚丙烯酰胺 凝胶 及其 制备 方法 | ||
本发明涉及蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳技术领域,尤其是一种用于小分子量蛋白质分离的聚丙烯酰胺凝胶,该凝胶包括丙烯酰胺、N,N‑甲叉双丙烯酰胺、超纯水、凝胶缓冲液、甘油、过硫酸铵溶液和四甲基乙二胺,凝胶缓冲液包括硼酸和Tris‑HCl溶液,凝胶缓冲液的pH值为7.0。本发明以Tris‑硼酸为缓冲体系制备聚丙烯酰胺凝胶,对小分子蛋白质实现很好的分离,蛋白条带清晰锐利,分离效果与目前常用的小分子蛋白分离凝胶Tris‑Tricine聚丙烯酰胺凝胶相当,分离效果甚至优于Tris‑Tricine,这种方式大大降低了试剂的使用成本,并且可得到更优的分离效果。
技术领域
本发明涉及蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳技术领域,尤其涉及一种用于小分子量蛋白质分离的聚丙烯酰胺凝胶及其制备方法。
背景技术
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种利用聚丙烯酰胺凝胶为介质进行蛋白质分离分析检测的技术,聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N,N-甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子,酰胺侧链聚合后形成网状结构具备分子筛的作用,凝胶形成的网状孔径大小与凝胶浓度成反比,浓度越大,孔径越小,分离小分子量蛋白质能力越强;反之,浓度越小,孔径越大,分离大分子蛋白质效果较好,蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于三个主要因素:凝胶孔隙度的大小、它所带净电荷以及分子的大小和形状,当消除电荷的影响时,影响迁移率的就是分子量大小和孔隙度,凝胶电泳技术分离蛋白的原理基于此;
用于制备聚丙烯酰胺凝胶的缓冲体系有很多种,例如Tris-Glycine,Bis Tris-MOPS,Tris-Acetate,Tris-Tricine等。其中大部分都是用于分离中等及以上大小分子量的蛋白质,用于小分子量蛋白质分离需要很高浓度的凝胶,浓度高凝胶的脆性高,对于可能的后续回收蛋白存在一定困难。在相同浓度凝胶条件下,对小分子量蛋白质分离的缓冲体系常用Tris-Tricine,但是Tricine试剂的成本相对较高。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在小分子量蛋白质分离的缓冲试剂成本高的缺点,而提出的一种用于小分子量蛋白质分离的聚丙烯酰胺凝胶及其制备方法。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
设计一种用于小分子量蛋白质分离的聚丙烯酰胺凝胶,该凝胶包括丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、超纯水、凝胶缓冲液、甘油、过硫酸铵溶液和四甲基乙二胺,所述凝胶缓冲液包括硼酸和Tris-HCl溶液。
优选的,所述凝胶缓冲液的pH值为7.0。
优选的,所述Tris的浓度为50-200mM,所述硼酸的浓度为50-200mM。
本发明还提供了一种用于小分子量蛋白质分离的聚丙烯酰胺凝胶的其制备方法,包括如下步骤:
步骤1:配制30%丙烯酰胺储备液,其中丙烯酰胺和N,N-甲叉双丙烯酰胺的质量比为29:1,具体的实施步骤如下:
A、首先,称取29g的丙烯酰胺以及1g的N,N-甲叉双丙烯酰胺加入混合容器中;
B、然后,向容器中加入超纯水,使得丙烯酰胺和N,N-甲叉双丙烯酰胺溶于超纯水中;
C、最后,将混合溶液定容至100mL;
步骤2:配制10%过硫酸铵储备液,称取100mg过硫酸铵溶于1mL超纯水中得到混合溶液;
步骤3:配制2.5×凝胶缓冲液,具体的实施步骤如下:
a、称取3.7856g Tris base和2.3175g硼酸混合加入容器中,并加入80mL超纯水;
b、向混合溶液中继续加入HCl滴定到pH为7.0;
c、最后将混合溶液定容至100mL;
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