[发明专利]一种运载亚铁离子的荧光纳米粒子的制备方法及其在制备纳米亚铁离子复合物中的应用

权利要求书

1.一种运载亚铁离子的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1、取烤牛肉，浸泡于乙醇中，40～80Hz超声10～60min，抽滤取溶液，40～70℃旋转蒸发至所述溶液体积的1/8～1/10，得粗提物溶液；

S2、使用有机溶剂，对步骤S1所述粗提物溶液萃取脱脂，收集水相；其中，所述有机溶剂为氯仿或乙酸乙酯中的一种或两种；

S3、使用G25葡聚糖凝胶柱层析对步骤S2所述水相进行纯化，所述水相的上样量和柱体积的比为1:4mL/cm³，用100～250倍柱体积的去离子水洗脱，收集365nm激发下产生荧光的洗脱液，40～70℃旋转蒸发浓缩至所述洗脱液原体积的1/8～1/10，得纳米粒子浓缩液；

S4、使用ODS-BP色谱柱纯化步骤S3所述纳米粒子浓缩液，ODS-BP填料粒径为10μm，色谱柱内径为20mm，长度为300mm，流动相为体积分数5％～20％的甲醇水溶液，所述纳米粒子浓缩液的上样量为5～15mL，流速为16～20mL/min，洗脱时间为30～120min；检测器为荧光检测器，荧光光谱激发波长为320nm，发射波长为398nm，收集具有荧光的洗脱液，得到荧光纳米粒子水溶液，40～70℃旋转蒸发至所述荧光纳米粒子水溶液原体积的1/8～1/10，冷冻干燥，得运载亚铁离子的荧光纳米粒子。

2.根据权利要求1所述运载亚铁离子的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S1所述烤牛肉的制备方法为：取牛肉，绞碎成肉馅，置于200～280℃烤制10～50min，得烤牛肉。

3.根据权利要求1所述运载亚铁离子的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S1所述烤牛肉和乙醇的重量体积比为1:2g/mL。

4.根据权利要求1所述运载亚铁离子的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S2所述萃取脱脂具体为：取步骤S1所述粗提物溶液，加入其3倍体积的有机溶剂，震荡混匀，静置至分层，除去有机溶剂，取水相；共萃取3～5次，所述有机溶剂为氯仿或乙酸乙酯中的一种或两种。

5.根据权利要求1所述运载亚铁离子的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S3所述洗脱时，G25葡聚糖凝胶柱和蠕动泵相连，所述蠕动泵的转速是40～180rpm。

6.根据权利要求1所述运载亚铁离子的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S4所述冷冻干燥具体为：-50～50℃，真空度为1～50Pa，干燥10～72h。

7.一种纳米亚铁离子复合物的制备方法，其特征在于，包括步骤：

取权利要求1-8任一方法制备的运载亚铁离子的荧光纳米粒子与亚铁离子混合，加入pH5、50mM醋酸钠缓冲溶液使其溶解，得混合液；所述混合液中运载亚铁离子的荧光纳米粒子的终浓度为2～10mg/mL，亚铁离子的终浓度为1～5mM；将所述混合液置于30～90℃加热30min，使用3000Da超滤离心管进行超滤离心，收集分子量大于3000Da的溶液，将其冷冻干燥，得纳米亚铁离子复合物。

8.根据权利要求7所述纳米亚铁离子复合物的制备方法，其特征在于，所述亚铁离子为氯化亚铁。

9.根据权利要求7所述纳米亚铁离子复合物的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥具体为：-50～50℃，真空度为1～50Pa，干燥10～72h。

10.根据权利要求7所述纳米亚铁离子复合物的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1、取牛肉，绞碎成肉馅，置于260℃烤制30min，得烤牛肉；取所述烤牛肉500g，浸泡于1L的乙醇中，70Hz超声30min，抽滤取溶液，65℃、80rpm旋转蒸发至100mL，得粗提物溶液；

S2、取步骤S1所述粗提物溶液，加入其3倍体积的乙酸乙酯，震荡混匀，静置直至分层，除去上层乙酸乙酯，取下层水相A；取所述下层水相A加入其3倍体积的乙酸乙酯，震荡混匀，静置直至分层，除去上层乙酸乙酯，取下层水相B；取所述下层水相B加入其3倍体积的乙酸乙酯，震荡混匀，静置直至分层，除去上层乙酸乙酯，取下层水相C；

S3、使用G25葡聚糖凝胶柱层析对步骤S2所述水相C进行纯化，所述水相C的上样量和柱体积比为1:4mL/cm³，用200倍柱体积的去离子水洗脱，洗脱时所述G25葡聚糖凝胶柱和蠕动泵相连，所述蠕动泵的转速为180rpm，收集使365nm激发下产生荧光的洗脱液，65℃、80rpm旋转蒸发浓缩至所述洗脱液原体积的1/10，得纳米粒子浓缩液；

S4、使用ODS-BP色谱柱纯化步骤S3所述纳米粒子浓缩液，ODS-BP填料粒径为10μm，色谱柱内径为20mm，长度为300mm，流动相为体积分数10％的甲醇水溶液，所述纳米粒子浓缩液的上样量为10mL，流速为20mL/min，洗脱时间为60min；检测器为荧光检测器，荧光光谱激发波长为320nm，发射波长为398nm，收集具有荧光的洗脱液，得到荧光纳米粒子水溶液，65℃、80rpm旋转蒸发至所述荧光纳米粒子水溶液原体积的1/10，-20℃、真空度为10Pa、冷冻干燥48h，得运载亚铁离子的荧光纳米粒子；

S5、取步骤S4所述运载亚铁离子的荧光纳米粒子500mg与0.025g氯化亚铁混合，加入50ml、pH5、50mM醋酸钠缓冲溶液使其溶解，得混合液；将所述混合液置于50℃加热30min，使用3000Da超滤离心管4℃、8000rpm超滤离心10min，收集分子量大于3000Da的溶液，-20℃、真空度为10Pa、冷冻干燥48h，得纳米亚铁离子复合物。