[发明专利]化合物diaporisoindole A的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了化合物diaporisoindole A的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明从巴戟天内生真菌Diaporthe lithocarpus A740的固体发酵培养物中制备分离得到化合物diaporisoindole A，其结构式如式(Ⅰ)所示。本发明通过实验发现，diaporisoindole A具有较强的抗肿瘤活性，可以用于制备抗肿瘤药物，为研究与开发新的抗肿瘤药物提供了候选化合物，同时为开发利用药用植物内生微生物来源的天然活性物质提供了科学依据。

技术领域：

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及化合物diaporisoindole A的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

癌症正严重威胁着人类的健康。目前，我国每年死于癌症的人数为250万人左右，全球每年死于癌症的人数约为1000万，而且这个数字还在逐年增长。预计到2030年，全球每年新增的癌症病例将达到2140万，死亡人数将超过1100万。因此，研发新颖特异的抗肿瘤药物对于人类健康有着十分重要的现实意义。

药用植物内生真菌能产生与宿主相似或新颖的活性次生代谢产物，已成为人类寻找新药源的重要资源。迄今，已从药用植物内生真菌中发掘出大量具有抗癌活性的次级代谢产物，其结构新颖、多样，活性显著。此外，内生真菌具有容易培养、生长快，发酵周期短等优点。

发明内容：

本发明的目的是为了克服现有技术中的缺陷，提供一种化合物diaporisoindoleA的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用

本发明的第一个目的是提供化合物diaporisoindole A的制备方法，所述的化合物diaporisoindole A是从巴戟天内生真菌Diaporthe lithocarpus A740的固体发酵培养物中制备得到。

具体步骤如下：

a)制备Diaporthe lithocarpus A740的固体发酵培养物，固体发酵培养物经过乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏；

b)将浸膏过硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯作为流动相，从石油醚-乙酸乙酯体积比100:0～1:2梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积比1:1梯度下洗脱下来的馏分Fr.1；

c)馏分Fr.1经LH-20凝胶柱层析，以体积比为1:1的氯仿-甲醇作为流动相洗脱，后经反相硅胶柱层析，以甲醇/水作为流动相，从体积分数50％-100％线性梯度洗脱，收集体积分数80％的甲醇/水梯度洗脱下来的馏分经纯化后得到化合物diaporisoindole A。

步骤a)所述的制备Diaporthe lithocarpus A740的固体发酵培养物是通过以下方法制备的：将活化的巴戟天内生真菌Diaporthe lithocarpus A740接入种子培养基中，28℃，200rpm，培养84h制得种子液，将种子液以质量分数10％的接种量接入到固体发酵培养基中，28℃，静置培养30d，而制得Diaporthe lithocarpus A740的固体发酵培养物；所述的种子培养基每升是通过以下方法配制的：用适量水煮200g的马铃薯，过滤得马铃薯汁，再加入葡萄糖20g、KH₂PO₄ 3g、MgSO₄ 1.5g和VitB₁ 10mg，用水补足至1000mL；所述的固体发酵培养基为大米培养基。

本发明的第二个目的是提供化合物diaporisoindole A在制备抗肿瘤药物中的应用。

所述的抗肿瘤药物优选为抗肝癌、乳腺癌、神经胶质瘤或非小细胞肺癌的药物。

本发明的第三个目的是提供一种抗肿瘤药物，包含化合物diaporisoindole A作为活性成分。