[发明专利]一种滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法

说明书

本发明提供一种滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法，所述方法包括先复苏保存在液氮环境中的滑膜肉瘤患者肿瘤组织块，再在无菌条件下将复苏的患者肿瘤组织块异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内，所述异种原位移植包括选用年龄在2～6周的免疫缺陷小鼠，小鼠性别与患者性别保持一致，将复苏的患者肿瘤组织块浸泡在含胎牛血清的无菌孵育液中，小鼠麻醉后固定，将患者肿瘤组织块植入小鼠的关节囊中，缝合切口，养育小鼠使得其关节囊中肿瘤生长。相比于皮下建模，原位建模情况更真实，筛选出来的药物方案能更好地用在患者身上，且原位建模理论上来说比皮下建模会更容易发生肿瘤转移。

技术领域

本发明涉及肿瘤移植小鼠模型的建立领域，具体涉及一种滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法。

背景技术

滑膜肉瘤(Synovial sarcoma，SS)是一种高度恶性的软组织肉瘤，约占软组织肉瘤的7-10％。由于SS组织起源复杂，没有明确的危险因素，病理形态多变，良恶性分界困难，因此，其诊断、鉴别诊断和分类就成为临床面临的难题。SS常见于20-30岁男性(男/女约为1.2：1)，主要好发于四肢大关节附近，但全身几乎任何部位都可发生，且SS几乎不发生在关节内，也和正常滑膜组织没有关系。原发SS约80％发生在手足部位，20％左右发生在非手足部位如肋骨、心包、肺脏和腹壁。绝大多数SS能转移到肺，腹腔内转移少见。既往研究认为，大范围切除瘤体及周围可切除的组织是治疗SS的首选方法，但其复发率高，故综合治疗成为改善SS预后的重要手段。这为患者及其家庭带来极大的精神伤害，也为社会乃至国家都带来沉重的经济负担，带来更大的社会问题。因为滑膜肉瘤组织异质性的存在，既往基于滑膜肉瘤细胞系的基础研究结果很难在临床滑膜肉瘤患者体内重现，较大程度导致临床滑膜肉瘤诊治水平的滞后。

肿瘤模型是肿瘤研究的重要载体。研究发现，细胞在传代过程中不断适应体外环境，生物学特点与在体肿瘤细胞不符，细胞系异种移植模型与患者本身肿瘤存在较大一致性，而且现有的肿瘤动物模型缺乏免疫系统，模型的缺陷导致抗肿瘤药物临床试验的失败率高。

因此，利用与患者原发肿瘤同质性更好的患者来源的人源性异种移植模型(patient-derived xenograft，PDX)模型意义深远，其可以深入探讨滑膜肉瘤发病机制，基于PDX研发的成果可在患者体内得到较好的重复，同时可以大量扩增临床患者体内有限的滑膜肉瘤样本，使用异种移植小鼠代替临床患者进行不同组合药物筛选，从而选择最合适的药物，大大提高有效性并降低药物副作用。

人源性肿瘤异种移植(patient derived xenograft，PDX)模型是一种体内模型，通过将病人的新鲜肿瘤组织处理后直接移植到免疫缺陷小鼠上，依靠小鼠提供的环境生长与逐步传代，能以小鼠为载体大量扩增患者肿瘤组织。PDX模型有如下优点：首先，其相当于一个模型对应一个病人，能很好地反应不同个体间肿瘤的差异性，相较于传统模型更能够反应临床病人的实际情况；其次，PDX模型可以进行传代，并且传代的肿瘤组织能够和初始肿瘤组织在基因拷贝数、基因突变和表达模式等保持高度的一致性，相当于对于病人肿瘤样本进行了扩增，这就为药物筛查和病人患病机制研究提供了很好的条件；再次，PDX培养的肿瘤块，可以冻存起来复苏之后依然能够构建新的PDX模型，相当于构建了不同病人的肿瘤活体库。

现有的技术主要是通过将新鲜滑膜肉瘤组织进行切碎处理或进行细胞匀浆化处理后，在皮下建模。例如本申请人在先申请的发明CN201910462582.8中提供一种滑膜肉瘤细胞系hSS-005R及其子代细胞系。其中包括取滑膜肉瘤细胞系中的hSS-005R细胞进行皮下单侧接种小鼠，接种1～3周后，肿瘤开始形成并生长，接种后30～50天的小鼠为医药研究用小鼠模型。

发明内容

但匀浆处理后被认为破坏了肿瘤组织本身微环境的特点，不能良好的保持肿瘤与周围间质与患者的一致性。另外，滑膜肉瘤好发于关节附近，皮下建模被认为不能良好模拟肿瘤发生环境。而本发明成功建立了小鼠膝关节内组织块移植方式，较好地保留了肿瘤与周边间质的稳定关系，并成功建立了滑膜肉瘤关节原位建模模型，保留了模型肿瘤生长环境与患者肿瘤的一致性。