[发明专利]测量装置和测量方法

说明书

测量装置(1A)具备干涉图像取得部(2)、荧光图像取得部(3)、运算部(4)和时序控制电路(5)。运算部(4)基于由干涉图像取得部(2)取得的干涉图像来制作光学厚度图像，并且制作表示由荧光图像取得部(3)取得的荧光图像中的像素值大于阈值的区域的掩模图像，并且在由光学厚度图像中的掩模图像表示的区域中求得光学厚度的积分值。由此，实现了能够精确测量样品中的对象物的量的装置和方法。

技术领域

本发明涉及测量装置和测量方法。

背景技术

需要通过在生物体外(in vitro)准确地测量从被检测体提取的生物体样品中所包含的脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)的总量。被测量的量是生物体样品(例如，试管中的液体中的细胞或者被接种在培养皿中的细胞)中所包含的DNA的总量。观察或测量从样品整体中从以规定的比率x抽样的部分，并且将该部分中所包含的DNA的总量除以抽样率x，由此能够求得样品整体中所包含的DNA的总量。

吸收法和荧光法是作为测量样品中所包含的DNA的总量的方法。在吸收法中，将DNA的吸收波长的光照射在样品上，并测量样品中的光的吸收量，由该吸收量根据朗伯-比尔定律能够求得该样品中的DNA的总量。在荧光法中，对样品中的DNA进行特异性荧光染色，测量当将激发光照射在该样品上时所产生的荧光的强度，根据其荧光的强度能够求得该样品中的DNA总量。

另外，由于能够推测每个细胞核中含有的DNA的量，因此，通过将细胞核的区域特异性地染色，并且对其染色区域的个数进行计数，而能够求得样品中所包含的细胞核的个数，进一步，能够由该细胞核的个数求得样品中的DNA的总量(参照非专利文献1)。

专利文献1：国际公开第2016/121250号

非专利文献1：Paul Held et al.,用Cytation^TM细胞成像多模微板阅读器和DAPI染色细胞分析核染色细胞(Analysis of Nuclear Stained Cells,Using the Cytation^TM3Cell Imaging Multi-Mode Microplate Reader with DAPI-Stained Cells),BioTekInstruments,Inc.,Application Note,AN041013_13,Rev.04/10/13,pp.1-9(2013)

发明内容

然而，无论是对于样品的整体或其一部分，都难以准确地求得在其中所包含的DNA的总量。也就是说，在吸收法中，测量结果受到除DNA之外的光吸收物质的影响。在荧光法中，测量结果受到除DNA之外的荧光物质的影响和背景光(例如自发荧光)的影响，另外，荧光染色的染色率根据细微的条件而会产生大变动。在吸收法或荧光法的任意一个方法中，都可以近似地使用浓度高的样品，但是精确测量浓度低的样品则是困难的。

此外，在荧光法中，在样品的浓度非常高并且细胞彼此多层地上下重叠的情况下，沿着荧光激发光的光轴在激发光附近存在的细胞也将会吸收激发光。因此，在离激发光较远侧的细胞上无法达到足够多的激发光，其结果，产生所得的荧光值与实际的细胞数相比被低估的问题。由于这些因素，难以准确地求得样品中的DNA总量。

另外，在通过对染色区域的个数进行计数来求得细胞核的个数的情况下，会出现以下问题。也就是说，尽管原来是一个细胞核，但是当其细胞核被分裂为两个时，所得的细胞核的个数比实际多。相反地，尽管原来是两个细胞核，但是当其两个细胞核互相接触或重叠而成为一个染色区域时，所得的细胞核的个数比实际少。如上所述，在对染色区域进行计数的情况下，也难以准确地求得细胞核的个数(以及DNA总量)。

上述的问题不仅存在于求得生物体样品中的细胞核的个数(进一步为DNA总量)的情况，而且也存在于求得样品中的其他的对象物的量的情况。