[发明专利]一种检测副溶血性弧菌的方法

权利要求书

1.一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备磁性金属模拟酶Fe₃O₄@Au@Pt，制备检测线包被副溶血性弧菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体的试纸条；

（2）在试纸条检测区域下方放置磁铁；

（3）磁性金属模拟酶的制备：合成磁性纳米颗粒Fe₃O₄，在其表面包被一层金壳，得到Fe₃O₄@Au纳米颗粒，接着在Fe₃O₄@Au纳米颗粒表面包被一层铂，得到Fe₃O₄@Au@Pt纳米颗粒；在Fe₃O₄@Au@Pt纳米颗粒表面修饰副溶血性弧菌抗体；

（4）检测预处理的样品中副溶血性弧菌含量：样品溶液在试纸条上层析结束后，在检测区域加入一定量的3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢溶液，反应5分钟后，拍下检测区域的图像，基于图像定量测定样品中的副溶血性弧菌含量。

2.根据权利要求1所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，所述的磁铁的磁场强度在20mT-200mT。

3.根据权利要求1所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括衬板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被副溶血性弧菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体。

4.根据权利要求3所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，试纸条的制备方法包括以下步骤：

（1）磁性金属模拟酶的制备；

（2）样品富集预处理：将修饰副溶血性弧菌抗体的Fe₃O₄@Au@Pt纳米颗粒溶液加入到样品溶液中充分反应，富集样品中存在的副溶血性弧菌，然后在外加磁场条件下，分离出结合副溶血性弧菌的免疫磁性纳米颗粒，重新溶解在PBS溶液中；

（3）硝基纤维膜的处理：将副溶血性弧菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线，烘干，即得到处理后的硝基纤维膜；

（4）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫和硝酸纤维素膜，再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸，组装后裁剪为60mm长，3.8mm宽的试纸条，即得到定量检测副溶血性弧菌的免疫层析试纸条，将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。

5.根据权利要求1所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，金磁纳米颗粒Fe₃O₄@Au@Pt直径为50-200nm。

6.根据权利要求5所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、磁性纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被副溶血性弧菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体；所述纳米颗粒标记物结合垫有修饰副溶血性弧菌抗体的包被铂的金磁纳米颗粒Fe₃O₄@Au@Pt。