[发明专利]一种检测空肠弯曲杆菌的方法

说明书

本发明涉及一种检测空肠弯曲杆菌的方法，包括以下步骤：（1）制备检测线包被空肠弯曲杆菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体的试纸条；（2）在试纸条检测区域下方放置磁铁；（3）检测空肠弯曲杆菌含量。本发明的试纸条基于在检测区域聚集的Fe₃O₄@Au所产生的磁信号，可定量测定样品中的空肠弯曲杆菌含量。本发明的试纸条检测限低（1cfu/mL、10 cfu/mL）、特异性好、成本低廉、检测时间短。此外，该类型试纸条不需要任何额外设备即可实现对目标物的快速灵敏检测，能够满足现场快速检测的需求，适用于液体样品中致病菌及各种有毒有害物质的检测，极具实用价值。

技术领域

本发明属于分析检测领域，具体涉及一种检测空肠弯曲杆菌的方法。

背景技术

空肠弯曲杆菌，一种人畜共患病病原菌，是威胁人类健康的主要病原菌之一。由于其广泛存在于鸟、禽、狗、猫等动物体内，可通过污染肉、奶及未经消毒处理的水而导致感染，由其引发的疾病往往人群数量多，分布广，给食品安全和人们健康带来巨大的威胁。因此，食品中空肠弯曲杆菌的检测具有非常重要的意义。

目前常用的检测食源性致病菌的方法主要有平板计数法、重组酶聚合酶扩增法、即时聚合酶链锁反应法、酶联免疫吸附测定法、表面等离子共振法、石英晶体微天平传感器、阻抗型免疫传感器、颜色传感器、荧光免疫分析法等。这些现有的检测方法通常需要对样品进行分离、纯化培养、富集，步骤繁多、实验周期长，致使整个检测过程费时费力，不能满足现场快速检验的需要。

免疫层析技术因其成本低、快速、简单、便携等特点在食品安全领域有着巨大的应用前景。然而，传统的基于胶体金的免疫层析技术存在灵敏度低的缺陷，极大限制了其应用的广度和商业化的可能性。因此，采用新策略克服免疫层析技术灵敏度低的瓶颈问题，对于拓展其应用范围，提高其实用性就变得尤为必要。

发明内容

为了解决这一阻碍免疫层析技术应用的瓶颈，本发明中，我们通过将经典采用的胶体金置换为磁性金纳米颗粒，采用外加磁场降低其在硝基纤维膜上的移动速率的方式克服了免疫层析技术灵敏度低的缺陷。该策略把磁性纳米颗粒的高选择性、可富集性及流速可控性与免疫层析技术高通量、快速、简捷的优势相结合，大幅提高了检测灵敏度。

本发明涉及的方法的基本原理如下：不同于经典胶体金免疫层析法，本发明提出的基于“磁聚焦”策略的免疫层析法使用Fe₃O₄@Au纳米颗粒代替了胶体金纳米颗粒，并在试纸条检测区域下方放置一块小磁铁。

方法1中：将修饰空肠弯曲杆菌抗体的Fe₃O₄@Au纳米颗粒喷在结合垫上。将空肠弯曲杆菌抗体和羊抗鼠IgG固定在硝基纤维膜的特定区域分别形成检测线和质控线。当将样品溶液滴加到样品垫上时，样品在毛细作用下在试纸条上流动，当移动到结合垫时，基于抗原抗体间的免疫反应，修饰抗体的Fe₃O₄@Au将与样品中含有的空肠弯曲杆菌结合，形成Fe₃O₄@Au-抗体-目标菌复合物。样品继续在硝基纤维膜上继续流动，当复合物流动至检测线区域时，由于磁场的作用，有磁性的Fe₃O₄@Au纳米颗粒会使得流速明显减缓，这样固定在硝基纤维膜上的抗体即可有更长的时间与Fe₃O₄@Au-抗体-目标菌复合物结合形成“三明治”夹心结构。而没有结合空肠弯曲杆菌的复合物则继续向前移动，在质控线处与二抗结合。