[发明专利]一种miR-92促进剂及其注射剂的制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种miR‑92促进剂及其注射剂的制备方法和应用，属于水产生物技术领域，所述miR‑92促进剂为单链小RNA；所述单链小RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，具体为：5’‑AAUUGCACUCGUCCCGGCCUGC‑3’；所述单链小RNA的3’末端进行胆固醇修饰，3’末端四个碱基CUGC位置分别加入四个硫代骨架进行修饰，5’末端两个碱基AA位置加入两个硫代骨架进行修饰，全链进行2’甲基化修饰。本发明的miR‑92促进剂能够有效增强鱼体内miR‑92的表达，从而抑制其靶基因CaSR的表达；通过精准靶向分子生理干预，可以有效的增强巨噬细胞活性，提高其抗链球菌感染能力。

技术领域

本发明涉及水产生物技术领域，尤其涉及一种miR-92促进剂及其注射剂的制备方法和应用。

背景技术

链球菌是一种广泛分布于自然界的革兰氏阳性菌，是人类的重要病原之一，也是其他多种脊椎动物包括猪、牛、鱼等的重要病原菌。目前已有多个国家报道了鱼类链球菌病的暴发与流行，受感染的鱼类包括多种海水和淡水鱼类，以温水性鱼类最为严重。近年中国罗非鱼链球菌感染的报道也呈现增加趋势。

巨噬细胞是一种抗原递呈细胞，同时具有很强的吞噬和消化异物抗原的能力，是固有免疫系统的主要效应细胞之一。链球菌感染能在短期内明显刺激巨噬细胞功能呈现活跃状态。因此，如何增强罗非鱼头肾巨噬细胞的呼吸爆发活性与吞噬活性，增加巨噬细胞吞噬病原菌的能力，从而达到促进罗非鱼健康养殖的目的成为我们当前迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种miR-92促进剂及其注射剂的制备方法和应用，该miR-92促进剂能够增强罗非鱼巨噬细胞呼吸爆发活性与吞噬活性，增加巨噬细胞吞噬病原菌的能力，从而达到促进罗非鱼健康养殖的目的。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种miR-92促进剂，所述miR-92促进剂为单链小RNA；所述单链小RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，具体为：5’-AAUUGCACUCGUCCCGGCCUGC-3’；

所述单链小RNA的3’末端进行胆固醇修饰，3’末端四个碱基CUGC位置分别加入四个硫代骨架进行修饰，5’末端两个碱基AA位置加入两个硫代骨架进行修饰，全链进行2’甲基化修饰。

本发明还提供了一种包含上述方案所述miR-92促进剂的巨噬细胞。

本发明还提供了一种注射剂，包括以下原料：上述方案所述miR-92促进剂和PBS缓冲液；所述miR-92促进剂的质量与PBS缓冲液的体积的比例为20nmol:150μL～300μL。

本发明还提供了上述方案所述注射剂的制备方法，包括以下步骤：

将miR-92促进剂和PBS缓冲液混合，静置后4000～6000rpm离心10～20s，取上清液得到注射剂。

本发明还提供了上述方案所述miR-92促进剂在增强罗非鱼体内miR-92的表达中的应用。

本发明还提供了上述方案所述miR-92促进剂在制备增强巨噬细胞活性的药物中的应用。

本发明还提供了上述方案所述miR-92促进剂在制备预防罗非鱼链球菌感染的药物中的应用。