[发明专利]一种拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因及其应用

说明书

本发明提供了一种拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因及其应用，该致敏蛋白的编码基因由SEQ ID NO：1的核苷酸序列构成。本发明还公开了含有该基因的表达载体、重组菌株；制备该致敏蛋白的方法以及该致敏蛋白的应用。根据本发明的拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因，其克隆入原核表达载体，构建重组表达质粒，再转入宿主菌并诱导表达，可获得拟穴青蟹致敏蛋白rScy p 9，利用该拟穴青蟹致敏蛋白rScy p 9与甲壳类过敏患者血清进行IgE结合能力的测定，可为过敏症状的临床诊断及致敏原详细筛查提供参考依据，使得针对Scy p 9的过敏性疾病的防控和治疗及时准确。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因及其应用。

背景技术

食物过敏作为食品安全的热点问题在全球引起了广泛关注，甲壳类水产品是联合国粮农组织公布的八大类过敏食物之一。拟穴青蟹(Scylla paramamosain)属于甲壳纲、青蟹属，广泛分布在整个印度洋及太平洋地区，该物种在我国东南沿海养殖的历史悠久；是渔业和水产养殖的商业重要螃蟹资源。但其产量和消费量的增加，也伴随着越来越多的食物过敏问题。

目前，拟穴青蟹的肌浆蛋白能够被65.4％的蟹类过敏患者血清中的特异性免疫球蛋白E识别。拟穴青蟹肌浆蛋白中的过敏原包括：精氨酸激酶、磷酸丙糖异构酶、肌质钙结合蛋白、细丝蛋白C；这四种过敏原分别被命名为Scy p 2、Scy p 8、Scy p 4和Scy p 9。其中，相对于拟穴青蟹其他过敏原较为系统的研究，在水产动物中无任何关于Scy p 9编码基因的报道；并且Scy p 9的分子量较大，为其基因克隆增加了难度，这很大程度上阻碍了其致敏性的探究，使得针对Scy p 9过敏性疾病的防控和治疗有限。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术中的技术问题之一。为此，本发明的第一个目的在于提出一种拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因，该基因克隆入原核表达载体，构建重组表达质粒，再转入宿主菌并诱导其表达，可获得拟穴青蟹致敏蛋白rScy p 9，再利用该拟穴青蟹致敏蛋白rScy p 9与甲壳类过敏患者血清进行IgE结合能力的测定，可为过敏症状的临床诊断及致敏原详细筛查提供参考依据。

本发明的第二个目的是提出一种重组质粒。

本发明的第三个目的是提出一种制备拟穴青蟹致敏蛋白的方法。

本发明的第四个目的是提出一种拟穴青蟹致敏蛋白。

本发明的第五个目的是提出一种拟穴青蟹致敏蛋白的应用。

在本发明的第一个方面中，根据本发明实施例，提供了一种拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

其中，该基因全长2544bp。

在本发明的第二方面中，根据本发明实施例，提供了一种重组质粒，其包含上述拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因。

在本发明的第三方面中，根据本发明实施例，提供了一种制备拟穴青蟹致敏蛋白的方法，其包括下列步骤：

(1)从拟穴青蟹肌肉组织中提取总RNA，反转录成cDNA；

(2)以cDNA为模板进行PCR扩增，获得上述的拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因；

(3)将步骤(2)获得的编码基因克隆入原核表达载体中，构建重组质粒；

(4)将所述重组质粒转入宿主菌，诱导其表达并纯化蛋白；

(5)将步骤(4)获得的纯化蛋白经质谱鉴定出能够匹配Scy p 9的有效特异性肽段，即获得拟穴青蟹致敏蛋白。