[发明专利]一种拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因及其应用

权利要求书

1.一种拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因，其特征在于，其核苷酸系列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种重组质粒，其特征在于，包含如权利要求1所述的拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因。

3.一种制备拟穴青蟹致敏蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从拟穴青蟹肌肉组织中提取总RNA，反转录成cDNA；

(2)以cDNA为模板进行PCR扩增，获得如权利要求1所述的拟穴青蟹致敏蛋白的编码基因；

(3)将步骤(2)获得的编码基因克隆入原核表达载体中，构建重组质粒；

(4)将所述重组质粒转入宿主菌，诱导其表达并纯化蛋白；

(5)将步骤(4)获得的纯化蛋白经质谱鉴定出能够匹配Scy p 9的有效特异性肽段，即获得拟穴青蟹致敏蛋白。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，PCR扩增的引物为：

Scy p 9-F1-1：5’-CATATGTGCAGGTAGCTCCACTCTCC-3’；

Scy p 9-R1-1：5’-GTCGACAGCCGGGTACATGGTTGTC-3’；

Scy p 9-F2-1：5’-GGTGGTCTCTCCCTCTCCAT-3’；

Scy p 9-R2-1：5’-TCTTGCACACGAGAAGGGAC-3’；

Scy p 9-F2-2：5’-CTGAGCCCGGCTACTACATC-3’；

Scy p 9-R2-2：5’-CTTGCAGTCCAGTGTTCCCT-3’；

Scy p 9-F3-1：5’-CGTGGGCATCAAGTTCAACG-3’；

Scy p 9-R3-1：5’-TGATGTGAGCCTTCTTGAGCC-3’；

Scy p 9-F3-2：5’-TGACTCGCCCTACAAGGTGT-3’；

Scy p 9-R3-2：5’-GGAGGCGTTGACAGTGAAGTT-3’；

Scy p 9-F3-3：5’-GCTCCTGCTACGTGTCCTAT-3’；

Scy p 9-R3-3：5’-TGATGTGAGCCTTCTTGAGC-3’。

5.一种拟穴青蟹致敏蛋白，其特征在于，采用如权利要求3-4中任一项所述的制备拟穴青蟹致敏蛋白的方法制得。