[发明专利]肿瘤酶响应型重组焦亡蛋白递药系统及其抗肿瘤用途

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白从N端到C端具有式I所示的结构：

Z0-Z1-Z2-Z3-Z4     (式I)

式中，

Z0为任选的标签元件；

Z1为焦亡蛋白的N结构域元件，所述N结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示；

Z2为穿膜肽序列元件，所述穿膜肽为TAT，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示；

Z3为能够被肿瘤微环境中特异性表达的蛋白酶特异性切割的肽序列元件，所述肽序列为天冬酰胺内肽酶（Legumain）特异性识别并切割的底物肽序列PTN；

Z4为焦亡蛋白的C结构域元件，所述C结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示；

“-”表示连接上述元件的肽键；

其中，在融合蛋白中，所述Z4元件通过特异性地结合Z1元件来抑制Z1元件的活性。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述焦亡蛋白具有诱导细胞膜破裂并释放大量内含物引起机体炎症反应的功能。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述焦亡蛋白为GSDMA3。

4.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述Z1中，所述N结构域为具有在细胞膜上形成孔洞的活性蛋白结构域。

5.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述Z2中，所述穿膜肽具有携带不同成分穿过细胞膜的功能。

6.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述穿膜肽为阳离子细胞穿膜肽。

7.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO: 4所示。

8.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的融合蛋白。

9.如权利要求8所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO: 5所示。

10.一种载体，其特征在于，所述载体中含有如权利要求8所述的多核苷酸。

11.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞中含有如权利要求10所述的载体，或基因组中整合有如权利要求8所述的多核苷酸。

12.一种生产如权利要求1所述的融合蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：

在适合表达的条件下，培养如权利要求11所述的宿主细胞，从而表达出如权利要求1所述的融合蛋白。

13.一种药物组合物，其特征在于，包括：

（a）如权利要求1所述的融合蛋白或其编码基因；

（b）药学上可接受的载体。

14.一种如权利要求1所述的融合蛋白、如权利要求8所述的多核苷酸、如权利要求10所述的载体或如权利要求11所述的宿主细胞的用途，其特征在于，用于制备一制剂或药物组合物，所述制剂或药物组合物用于选自下组的一种或多种：

（a）杀死肿瘤微环境中的肿瘤细胞；

（b）提高肿瘤微环境中的M1型巨噬细胞的数量，并降低肿瘤微环境中M2型巨噬细胞的数量；

（c）提高肿瘤微环境中的抗癌细胞因子、抗原提呈分子、效应T细胞、免疫原性细胞死亡（ICD）相关特征分子、促炎因子的水平；

（d）降低肿瘤增殖转移相关蛋白、促癌细胞因子的表达水平。

15.如权利要求14所述的用途，其特征在于，所述免疫原性细胞死亡（ICD）相关特征分子包括ATP、HMGB1、CRT。

16.如权利要求14所述的用途，其特征在于，所述促炎因子包括LDH。