[发明专利]一种酶催化合成头孢克洛的方法

说明书

本发明涉及一种酶催化合成头孢克洛的方法，在反应器中加入水，控制温度为5℃～20℃，加入头孢克洛母核7‑ACCA和头孢菌素合成酶，一次性加入或分次加入侧链D‑苯甘氨酸甲酯盐酸盐或D‑苯甘氨酸甲酯硫酸盐，调节pH为5.0～6.5，搅拌反应1.5～5小时，得到头孢克洛粗品结晶，其中，所述的水和所述的头孢克洛母核7‑ACCA的投料质量比为3～10∶1。本发明通过控制反应浓度、反应温度、加料方式，有效的控制头孢克洛粗品结晶的粒度，从而易于和头孢菌素合成酶分离，提高分离效率，简化生产投料操作，为工业化提供一种效率高的生产方法。

技术领域

本发明属于生物医药技术合成领域，具体涉及一种酶催化合成头孢克洛的方法。

背景技术

酶催化合成头孢克洛技术是近年来以生物合成代替化学合成开发较早的一种生物合成技术。由于酶催化的专一性，合成转化率高，是在水中反应的绿色合成、对环境友好的技术，目前该技术已经逐渐拓展到其它头孢类抗生素的合成。

本发明人的授权专利CN201310525754.4解决了酶催化合成和分离纯化问题。但该工艺主要存在三个方面的问题，第一方面是投料方式复杂，该专利需要将头孢克洛母核7-ACCA和侧链分别溶解后进行反应；第二方面是水的用量较大，因此，制得的头孢克洛在水中溶解的较多，使得后处理复杂且耗时；第三方面是该工艺制备得到的头孢克洛粗品结晶较细，粒径大概为200目左右，因此在将反应液进行过滤筛分离回收酶的时候，头孢克洛粗品容易粘结在酶的表面，需要进行多次洗酶才能够将酶表面的头孢克洛粗品洗净，在实验室操作时，洗酶的步骤大致需要花费30～45min，而进行工业化生产时，该步骤将耗时4～5小时，严重影响生产效率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种生产效率高的酶催化合成头孢克洛的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种酶催化合成头孢克洛的方法，在反应器中加入水，控制温度为5℃～20℃，加入头孢克洛母核7-ACCA和头孢菌素合成酶，一次性加入或分次加入侧链D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐或D-苯甘氨酸甲酯硫酸盐，调节pH为5.0～6.5，搅拌反应1.5～5小时，得到头孢克洛粗品结晶，其中，所述的水和所述的头孢克洛母核7-ACCA的投料质量比为3～10∶1。

本发明通过控制水的用量，以及采用固体直接投料的方式，配合反应参数的调整，使得制得的头孢克洛粗品结晶的粒径较大，从而不易于粘结在酶的表面，与酶分离较为简单，从而提高了生产效率。

本发明中，控制所述的头孢菌素合成酶的粒径大于所述的头孢克洛粗品结晶的粒径，从而使得头孢菌素合成酶和头孢克洛粗品结晶能够通过过滤筛进行分离。

优选地，所述的头孢菌素合成酶为山东新立泰制药有限公司的型号为A3的固定化酶，该酶能够更好的促进反应的进行，并保证头孢克洛粗品结晶的粒径合适。

优选地，所述的水和所述的头孢克洛母核7-ACCA的投料质量比为4～6∶1，从而在保证反应进行的同时，使头孢克洛溶解在水中的量减少。

优选地，控制温度为10℃～14℃，从而在保证反应的进行的同时，使头孢克洛粗品结晶的粒径合适。

优选地，所述的头孢克洛母核7-ACCA与所述的头孢菌素合成酶的投料质量比为1∶0.5～2，所述的头孢克洛母核7-ACCA与侧链质量比为1∶1～1.4。

优选地，采用浓度为2～6mol/L的氨水调节所述的pH。

优选地，采用分次加入所述的侧链时，在1.5～3小时内分20～40次投加。

优选地，采用分次加入所述的侧链时，加料结束后，再反应1～2小时。

优选地，反应结束后，反应液经过滤分离出所述的头孢菌素合成酶，采用母液进行多次洗酶后，经过滤得到所述的头孢克洛粗品结晶。