[发明专利]一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法

说明书

本发明涉及一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的超高效液相色谱‑高分辨四级杆飞行时间质谱分析方法，其特征在于：采用超声辅助单溶剂提取冻干食品中脂质，随后用超高效液相色谱‑高分辨四级杆飞行时间质谱联用在34 min内对正、负离子进行快速扫描，实现脂质的快速定性定量分析。该方法操作快速简单，提取时不受蛋白干扰，提取时间短，溶剂毒性小，重复性好，各类脂质回收率高，达到了高覆盖脂质的目的。

技术领域

本发明涉及一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，及其在定性定量分析不同类型冻干食品脂质中的应用，属于分析检测领域。

技术背景

冻干食品是采用真空冷冻干燥技术，快速冻结，真空下脱水得到的，其营养成分得到了最大限度的保留，且无须添加防腐剂就可长时间保存，备受研究人员关注。脂质作为三大营养素之一，对人体营养和健康有非常重要的意义。脂质的结构和组成与其营养健康品质密切相关，不同类型的脂质在人体内生物利用度不同，因此，在分子水平上深入分析冻干食品中的脂质对其营养价值的研究非常重要。

传统的脂质分析方法主要有薄层色谱法(TLC)，气相色谱法，液相色谱法。但是这些方法只能检测脂肪酸含量或者某一类脂质的总含量，无法在分子水平上实现对脂质的准确定性定量分析。

最经典的脂质提取溶剂是氯仿/甲醇/水体系。然而，这种提取体系的一个重要缺陷是吸取富含脂质的下层氯仿时很容易引入来自两相界面处的蛋白，导致提取重复性差，且氯仿有较强的毒性，是致癌物。为了避免这个问题，Matyash等人提出了甲基叔丁基醚(MTBE) 作为脂质提取的有效溶剂，由于有机溶剂密度较低，因此有机相收集更容易。然而，已经观察到一些脂质类MTBE方法的回收率和重复性不令人满意，因为在收集脂质提取物时不可避免地扰乱水性和脂质层的界面，且甲醇对中枢神经系统伤害很大。单相溶剂提取可以消除由两相界面引起的污染和技术差异，通过提取液沉淀蛋白质，再通过离心去除，它们消除了对相的需要。甲醇，丁醇，MTBE及其混合物已用作单相提取溶剂，用于人血浆中脂质的提取，虽然这些提取试剂使得操作简单，通量和重复率提高，但是对于某一些脂质的回收率仍然不太理想。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法。该方法通量高，操作简单，覆盖脂质范围广，能够实现冻干食品中脂质的高效、快速检测。

本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案为：

一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，主要包括如下步骤：

第一步，称取一定量冻干食品，加入内标溶液；

第二步，第一步所得混合物中加入有机溶剂异丙醇，涡旋混匀；

第三步，第二步所得混合物进行超声处理，以辅助提取；

第四步，第三步超声处理完成后，用冷冻离心机离心，离心所得上清液即为提取液；

第五步，定量取第四步所得提取液，用有机溶剂异丙醇稀释，涡旋，然后经有机相滤膜过滤，所得溶液用于超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱分析，结合质谱数据、内标实现对冻干食品中脂质的定性分析和定量分析。

按上述方案，所述冻干食品包括冻干的肉、水产品、蛋、蔬菜、水果、保健品等，需要冷冻干燥后研磨至粉末状，备用。