[发明专利]一种通过体细胞重编程制备诱导多功能干细胞的方法在审
申请号: | 201910707125.0 | 申请日: | 2019-08-01 |
公开(公告)号: | CN112301052A | 公开(公告)日: | 2021-02-02 |
发明(设计)人: | 范靖;任芳;王安欣 | 申请(专利权)人: | 浙江霍德生物工程有限公司 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N15/86;C12N5/10 |
代理公司: | 北京金信知识产权代理有限公司 11225 | 代理人: | 徐琳;李维盈 |
地址: | 310018 浙江省杭州市经*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 通过 体细胞 编程 制备 诱导 多功能 干细胞 方法 | ||
1.一种通过体细胞重编程制备诱导多功能干细胞的方法,包括:将因子Oct4和Nanog作为重编程诱导因子导入体细胞后进行重编程;然后,将部分或完全重编程的体细胞培养在含有化学诱导剂的培养基中以得到诱导多功能干细胞,其中,所述化学诱导剂包括TGFβ受体抑制剂616452、环AMP激动剂Forskolin和糖原合成酶激酶抑制剂TD114-2。
2.根据权利要求1所述的方法,其中重编程诱导因子Oct4和Nanog以载体上携带的DNA的形式,以其mRNA的形式,或者以其蛋白产物的形式导入体细胞中。
3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述体细胞是皮肤来源的细胞,血液来源的细胞,尿液来源的细胞,肝细胞,上皮细胞,胃细胞,或者角质细胞。
4.根据权利要求3所述的方法,其中,所述皮肤来源的细胞是皮肤成纤维细胞。
5.根据权利要求3所述的方法,其中,所述血液来源的细胞是红系祖细胞。
6.根据权利要求1所述的方法,其中,所述体细胞来源于人。
7.根据权利要求1所述的方法,其中,
TGFβ受体抑制剂616452的工作浓度为0.1-20μM,更优选5-10μM,还更优选5μM;和
环AMP激动剂Forskolin的工作浓度为0.1-50μM,更优选2-20μM,还更优选10μM;和
糖原合成酶激酶抑制剂TD114-2的工作浓度为0.1-20μM,更优选2-10μM,还更优选5μM。
8.根据权利要求1所述的方法,其中,所述将Oct4和Nanog作为重编程诱导因子导入体细胞后进行重编程为:将含有Oct4和Nanog重编程诱导因子的载体通过电转的方式转入体细胞后进行重编程;或者,将含有以RNA形式存在的Oct4和Nanog重编程诱导因子的病毒Sendai Virus与细胞混合培养。
9.一种诱导多功能干细胞,其通过权利要求1-8中任一项所述的方法得到。
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