[发明专利]一种基于同位素内标评价内源性化合物基质效应的方法及应用

说明书

本发明提供一种基于同位素内标评价内源性化合物基质效应的方法及应用。本发明以液相色谱‑串联质谱检测婴幼儿乳粉中胆碱和左旋肉碱时，采用目标分析物所对应的同位素内标胆碱‑d4和左旋肉碱‑d3为研究对象进行基质效应评价(MEIS)。本发明针对内源性物质无空白样品的问题，通过采用同位素内标进行基质效应评价，不仅摒弃了传统提取后添加法需扣除基质本身信号值的分析步骤，弥补了因无空白基质无法采用柱后输入法进行基质效应评价的缺点，更重要的是可以对所分析的所有样本进行基质效应评价，具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于食品分析技术领域，具体涉及一种基于同位素内标评价内源性化合物基质效应的方法及应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

基质效应是HPLC-MS/MS检测中普遍存在的问题。当目标分析物的电离效率受到共洗脱化合物的影响时，基质效应(matrix effect，ME)就会产生。由于基质效应不仅影响目标物的响应值，还影响方法的精密度及准确度,所以在方法学评价时，基质效应也是大家讨论的一个重点。为了减少基质效应，报道多采用改变提取溶剂、增加净化步骤、优化色谱条件、选择不同的离子源等，但常不能完全去除。为了弥补基质效应，文献多采用配制基质匹配的校正曲线进行定量，或是通过同位素内标进行校准。

据发明人所知，目前评价基质效应的方法主要有提取后加入法和柱后输入法。其中，提取后加入法是用空白基质和纯溶剂配制相同浓度的目标分析物，采用相同的仪器条件分析测定，比较两者峰面积的差值。用公式表示为ME(％)＝(B/A-1)×100，其中A为纯溶剂中目标分析物的峰面积，B为空白基质溶液配制的目标分析物的峰面积。或是通过制作纯溶剂和基质匹配的校正曲线，通过比较两者斜率，来判定基质效应大小。此方式可以定量计算基质效应。而柱后输入法是在蠕动泵不断的注射一定浓度的目标分析物的同时，通过液相系统注入空白基质样品，此方法能实时查看谱图中的信号是抑制还是增强，被认为是一种动态技术，它能直观的展现整个采集过程的基质效应情况，但不能给出具体的数值。

然而，目前这两种技术都只是针对目标化合物进行评价，不适用于内源性分析物的基质效应评价。由于存在内源性分析物的样品不存在空白基质，所以当采用提取后添加法时需要一个繁琐的计算过程。采用峰面积比较时，需减掉样品本身的峰面积；若采用斜率比较，制作基质校正曲线时，需考虑样本本底值。由于柱后输注法液相输入的是空白基质，所以不适用于内源性化合物。更重要的是，这两种方法只能对特定的样本进行基质效应评价，不可能对每个样本进行评估。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供一种基于同位素内标评价内源性化合物基质效应的方法及应用。具体的，本发明针对液相色谱串联质谱在检测婴幼儿乳粉中内源性物质(胆碱和左旋肉碱)时评价基质效应存在由于无阴性基质、被分析物含量高等问题，导致基质效应评价不准确、繁琐等问题，从而提出上述方法，其具有良好的实际应用之价值。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明的第一个方面，提供一种基于同位素内标评价内源性化合物基质效应的方法，所述方法包括使用液相色谱串联质谱检测内源性化合物时，使用目标分析物所对应的同位素内标进行基质效应评价。

进一步的，上述方法具体包括：

纯溶剂同位素内标溶液的配制：将同位素内标添加到纯溶剂中；

基质匹配同位素内标溶液的配制：将同位素内标添加到经前处理后的样品基质中；

测定：将上述两种溶液注入液相色谱串联质谱系统进行分析，得到两种溶液的峰面积；