[发明专利]一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的制备方法及其肿瘤细胞活力的检测方法

权利要求书

1.一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的制备方法，其特征在于该制备方法具体为：

1)将氰基乙酸和2-甲氧基-5-苯磺酸重氮盐溶于无水乙醇中，在氢氧化钾的作用下，反应温度-10-5℃下，反应2-3.5h，

2)旋转蒸发除去无水乙醇，用异丙醇洗涤3次，析出固体物、经干燥后得到中间体甲臜，

3)将甲臜溶于DMSO溶剂中，加入氧化剂，在-15-1℃下，反应2-8h，经过滤、干燥得到含氰基的四唑盐粉末状固体，

4)将上述四唑盐溶于去离子水中，加入碱性离子液体[bmim]OH，升温至65-80℃，反应1-2.5h，旋蒸得到固体，用异丙醇洗，过滤得到成品。

2.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤1)中氰基乙酸与2-甲氧基-5-苯磺酸重氮盐的摩尔比为1：1.8，氰基乙酸、氢氧化钾与无水乙醇的重量比为84：170：3360，室温下搅拌溶解。

3.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤2)中异丙醇的重量与无水乙醇的重量相等。

4.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤3)中甲臜、氧化剂、DMSO的重量比1：1.2：2。

5.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤3)中氧化剂为二叔丁基过氧化物。

6.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤4)中的碱性离子液体[bmim]OH和去离子水的重量比在1：5-1：10之间。

7.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的制备方法，其反应方程式如式(1)所示：

8.一种肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂的肿瘤细胞活力的检测方法是用上述肿瘤细胞活力的四唑盐诊断试剂，通过比色试验,采用酶联免疫检测仪在440nm波长处测定其光吸收值，直接定量检测肿瘤细胞活力。