[发明专利]一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法

说明书

本发明涉及一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法，属于免疫染色技术领域。本发明中的染色试剂盒中过氧化物酶封闭剂可以对组织的内源性过氧化物酶进行封闭，避免内源性过氧化物酶对于染色结果的影响；过氧化物酶标二抗聚合物是基于HRP酶标系统，具有较高的灵敏度；基于过氧化物酶系统的蓝染底物和与蓝染底物匹配的蓝染缓冲液构成蓝染显色液，蓝染显色液在HRP酶的催化作用下，在抗原靶标位置形成蓝色的颗粒沉淀，可在显微镜下观察；并且在组织的阳性部位定位准确，信号清晰，与有色物质（黑色素或碳颗粒）对比鲜明，免疫组化结果清晰可辩。本发明中的酶标体系灵敏度高，特异性好，染色背景干净。

技术领域

本发明涉及一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法，属于免疫染色技术领域。

背景技术

免疫组织化学染色技术是应用免疫学基本原理-抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织切片或者细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性或定量研究的技术，具有特异、灵敏、准确等特点，予形态、机能、代谢为一体。该项技术在现代病理诊断工作中具有重要的作用。

目前，最常规的免疫组化显色方式是基于HRP酶标系统，显色底物为DAB的检测系统。在病理科的日常免疫组化检测工作中，存在一部分病理组织，这些组织中含有与DAB显色颗粒颜色近似的色素或者其他物质，如黑素瘤中的黑色素、肺癌组织中的碳颗粒等。这些物质大量的分布在组织细胞上，遮盖了组织细胞的形态结构，在采用传统的免疫组化显色方法时，DAB呈现的棕褐色或者棕褐色与这些物质的色彩难以区分，严重影响其免疫组化结果的判读。

传统的解决办法一般有两种，一种方法是在进行免疫组化试验前，对组织进行去黑素处理，采用强氧化剂去除色素，但是黑色素表现稳定，强烈的氧化处理容易导致组织切片中的部分抗原丢失和试验过程中的组织脱片问题，同时，碳颗粒等其他物质用强氧化剂也无法去除，该方法存在很多的局限性；另外一种方法是采用基于AP酶标系统，显色底物为FAST RED的检测系统进行这类组织的检测，该显色系统的阳性颗粒为红色，可以和色素进行区分，但是，此检测系统灵敏度低，操作时间长，易产生背景着色。

发明内容

本发明的目的是提供一种含色素组织免疫组化染色试剂盒，能够用于含色素组织的免疫组化染色。

本发明还提供了含色素组织免疫组化染色方法，能够在不去除组织色素时对于组织进行清晰的着色，并且具有较高的灵敏度。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种含色素组织免疫组化染色试剂盒，包括过氧化物酶封闭剂、过氧化物酶标二抗聚合物、基于过氧化物酶系统的蓝染底物、与蓝染底物匹配的蓝染缓冲液和红色衬染剂。

本发明中的染色试剂盒中过氧化物酶封闭剂可以对组织的内源性过氧化物酶进行封闭，避免内源性过氧化物酶对于染色结果的影响；过氧化物酶标二抗聚合物是基于HRP酶标系统，具有较高的灵敏度；基于过氧化物酶系统的蓝染底物和与蓝染底物匹配的蓝染缓冲液构成蓝染显色液，在组织的阳性部位定位准确，信号清晰，与有色物质（黑色素或碳颗粒）对比鲜明，免疫组化结果在自然光下清晰可辩，无需使用荧光观察；红色衬染剂能够将组织细胞核染成红色，作为阳性显色的衬色。

本发明中的蓝染底物在反应后生成蓝色沉淀，在自然光下显色为蓝色，能够与黑色素或碳颗粒区分开。优选的，所述蓝染底物中包括：联苯3,3,’4,4’-四氯化四亚铵、6-甲氧基-2-萘酚、Tris-HCl、氯化钠和丙二醇。更为优选的，所述蓝染底物的pH为7.3-7.9；所述蓝染底物中联苯3,3,’4,4’-四氯化四亚铵、6-甲氧基-2-萘酚、Tris-HCl 缓冲液、氯化钠和丙二醇的质量-摩尔-体积比为8-12g：0.3-0.7g：0.05-0.15mol：0.05-0.15mol：450-550mL。