[发明专利]一种基于荧光化学反应系统体外高通量筛查皮肤致敏原的方法

权利要求书

1.一种基于荧光化学反应系统体外高通量筛查皮肤致敏原的方法，其特征是包括以下步骤：

(一)荧光化学反应系统的制备：制备5-二甲氨基-N-2-巯基乙基萘-1-磺酰胺，简称DCYA；

(二)致敏原筛选试验

(2.1)建立待测组、阴性对照、阳性对照和空白对照各实验组，其中各实验组的组成如下表1所示：

表1各实验组的组成

(2.2)选取待测组，点样至TLC板，加入展开剂展开，检查TLC板是否有DCYA的黄色荧光点，计算Rf值，确定DCYA与待测物质是否发生反应；

(2.3)在步骤(2.1)中建立的各实验组中加入马来酰亚胺后过滤以除去未反应的带负电荷涡旋后，离心，取上清液，稀释后得稀释液；

(2.4)将稀释液转移至多功能微孔板检测系统，调节好温度和波长，读数；

(2.5)通过以下公式计算总反应指数RI；

式中代表：RI：总反应指数；BI：空白对照；PC：阳性对照；NC:阴性对照；R：待测物质；

(三)皮肤致敏性预测

据下表2中的预测模型作出皮肤致敏性判断：

表2.预测模型

所述标准缓冲溶 液的pH为10±0.02，在此条件下，DCYA变为带负电荷DCYAθ，与待测物质发生反应；

所述步骤(2.2)中选取待测组孵育20min±5min后，点样至TLC板；所述的展开剂为0.8％～0.9％甲醇的氯仿溶液；在紫外光波长366±5nm检查TLC板是否有DCYA的黄色荧光点；确定DCYA与待测物质是否能进行反应的Rf值0.32～0.34。

2.根据权利要求1所述基于荧光化学反应系统体外高通量筛查皮肤致敏原的方法，其特征是：步骤(2.1)中所述待测物质包括个人护理产品、家用洗涤产品、防腐剂、药品、植物提取物、医疗器械及其浸提物、生物材料、环境污染物以及其它皮肤接触产品；其中所述个人护理产品包括洗发香波、护发素、染发剂、护肤类、防晒类、粉底、BB霜、CC霜、眼影、唇彩、油、沐浴乳或身体乳；所述家用洗涤产品包括洗衣液、洗衣粉、肥皂、洗洁精、漂白剂、消毒液或柔顺剂；所述植物提取物包括植物粗提取物、植物精提取物及二者的混合物；所述其它皮肤接触产品包括纺织品的浸提物。

3.根据权利要求1所述基于荧光化学反应系统体外高通量筛查皮肤致敏原的方法，其特征是：步骤(2.3)中所述马来酰亚胺为色谱级化学试剂，购自SiliCycle公司，商品名为Maleimide(Si-MAL)，只有带负电荷DCYAθ会被马来酰亚胺过滤出来。

4.根据权利要求1所述基于荧光化学反应系统体外高通量筛查皮肤致敏原的方法，其特征是：步骤(2.3)中离心时在转速为14000±500rpm离心10±2分钟。

5.根据权利要求1所述基于荧光化学反应系统体外高通量筛查皮肤致敏原的方法，其特征是：步骤(2.3)中采用乙腈稀释至1mL得稀释液。

6.根据权利要求1所述基于荧光化学反应系统体外高通量筛查皮肤致敏原的方法，其特征是：步骤(2.4)中调剂温度为23±1℃，激发波长为350～420nm，发射波长为520nm。