[发明专利]一种非洲猪瘟病毒抗原双联检测试剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒抗原双联检测试剂及其制备方法，包括PVC底板，所述PVC底板的顶部从左到右依次设置有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜检测垫和吸水垫。本发明通过对AFSV主要的且相当保守的具有抗原性的两种蛋白(p30和p72)的检测，一次加样，可以同时获得两个结果，且两者任何一个出现阳性，即可提示出现了AFSV感染，提高检出率，并能快速检测出早期猪发热是否是非洲猪瘟病毒感染所致，及早发现疫情并采取有效防控措施，且灵敏度高、特异性强、速度快(5‑10min)、操作简便、重复性好、结构稳定、使用性能好，适用于养殖户开展自查或专业机构开展疫情调查。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体为一种非洲猪瘟病毒抗原双联检测试剂及其制备方法。

背景技术

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的，主要感染家猪、野猪、灌木猪等猪类的烈性传染病，死亡率高，给养猪业造成巨大的经济损失，ASFV是目前已知的唯一一种DNA虫媒病毒，ASFV只感染家猪和野猪，不感染人类，野猪感染ASFV后通常呈隐性感染，另外，软蜱也是ASFV的宿主和传播媒介。

猪感染ASFV的临床特征是高烧、腹泻、出血和皮肤泛红，一些临床症状和尸检结果，如脾肿大、淋巴结和肾脏出血，与猪感染古典猪瘟病毒的症状并无区别，现有技术还没有针对ASFV的疫苗和有效治疗方法，控制方式主要依靠执行严格的卫生防疫措施和焚毁病猪的方式，因此，ASFV的快速、可靠检测至关重要，目前，检测非洲猪瘟诊断方法有红细胞吸附试验、直接免疫荧光试验、动物接种试验、ELISA等。

目前，检测非洲猪瘟的主要试剂均依赖于进口，但由于ELISA操作方法相对复杂，每次均需做阴阳性对照，检测相对繁琐，为此，我们提出一种非洲猪瘟病毒抗原双联检测试剂及其制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种非洲猪瘟病毒抗原双联检测试剂及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种非洲猪瘟病毒抗原双联检测试剂及其制备方法，包括PVC底板，所述PVC底板的顶部从左到右依次设置有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜检测垫和吸水垫，且硝酸纤维素膜检测垫的内表面从左到右依次设置有p30蛋白检测线、p72蛋白检测线和质控线，所述胶体金标记垫的左侧位于样品垫的内侧，且硝酸纤维素膜检测垫的左侧位于胶体金标记垫的内侧，硝酸纤维素膜检测垫的右侧位于吸水垫的内侧。

优选的，所述胶体金标记垫的材质为聚酯膜，样品垫材质为聚酯膜或玻璃纤维素膜。

一种非洲猪瘟病毒抗原双联检测试剂及其制备方法的制备方法，其制备方法包括以下步骤：

A、制备样品垫：将样品垫置于处理液中浸泡，然后将含有处理液的样品垫置于温度为18-24℃、相对湿度小于40％的环境中烘干16-24h，备用；

B、制备胶体金标记垫：胶体金溶液、抗体标记及胶体金标记垫制备；

C、制备硝酸纤维素膜检测垫：①、按照配方要求配置好质控线和p30蛋白检测线、p72蛋白检测线的抗体溶液，且最终抗体溶液浓度为1.0-1.2mg/ml；②取硝酸纤维素膜(规格宽度25mm)，按照距离间隔一次性划出p30蛋白检测线、p72蛋白检测线和质控线，划膜时，抗体溶液的消耗量设定为1.0-1.2ul/cm，p30蛋白检测线包被有鼠p30蛋白单克隆抗体3，p72蛋白检测线包被有鼠抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体4，质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体；

D、贴板及切割：将样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜检测垫和吸水垫顺序搭接PVC底板上，并按照规格要求切割成宽度3.3mm(条型)和4mm(卡型)。

优选的，所述步骤A中，处理液为样品垫处理液，且处理液由0.5％吐温-20、1％BSA的pH为8.0的1mol/L磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液组成。