[发明专利]一种蟾酥中多种化学成分的含量测定方法

说明书

本发明公开了一种蟾酥中多种化学成分的含量测定方法，包括确定色谱条件，对照品溶液的制备，供试品溶液的制备和测定法等步骤。该方法可以在同一色谱条件下同时检测蟾酥中八种成分的含量，不仅能有效简化操作步骤，而且显著缩短了测定时间，大大提高了检测效率，有利于实现对蟾酥质量的全面控制。本发明的检测方法灵敏度高，八种成分的色谱峰分离度均大于1.5，且峰型完整，检测方法具有专属性，其准确性、重现性、线性关系、稳定性均能达到科研和生产的要求，适于推广应用。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种蟾酥中多种化学成分的含量测定方法。

背景技术

蟾酥是蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑框蟾蜍耳后腺及表皮腺体的分泌物，白色乳状液体或浅黄色浆液，有毒。蟾酥提取浆液，干燥，上色，密封保存后可以入药，是我国常用的一味传统名贵中药。其性温, 味辛, 有毒, 归心经, 具有解毒、止痛、开窍醒神之功效, 用于治疗痈疽疔疮、咽喉肿痛、中暑神昏、痧胀腹痛吐泻。而现代药理学研究表明, 蟾酥具有增强心肌收缩力、升压、抑制血小板聚集、增加冠状动脉血流、抗炎、抗辐射、抗肿瘤、降压和麻醉等药理活性。蟾酥亦是国家重点保护的Ⅱ级野生药材, 也是28种毒性中药材品种之一, 在国内外应用广泛。以蟾酥入药的制剂在《部颁标准》和《中国药典》2015年版中共有88个成方制剂 (329个批号)，其质量的好坏会直接影响制剂的疗效。并且蟾酥毒性也较大，用药不当会出现严重的毒副作用，2015版中国药典规定蟾酥不入汤剂，入丸散内服人体用量0.015～0 .03g，按成人60kg体重计算，人的服用剂量为0 .00025～0 .0005g/kg，对蟾酥的服用剂量有严格的要求。

但目前，对蟾酥的评价标准大多是以每种单项成分，或某几种成分的含量指标来表征其质量，其方法存在操作繁琐，检测时间长，检测不全面，且检测成本高等缺点。因此，有必要对该药物的含量测定方法进行研究，开发一种操作简单，全面、准确，且耗时短的方法，以便对蟾酥的质量进行有效全面的控制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蟾酥中多种化学成分的含量测定方法，该方法可以在同一色谱条件下同时检测蟾酥中华蟾酥毒基、酯蟾毒配基、日蟾毒他灵、蟾毒灵、沙蟾毒精、蟾毒它灵、远华蟾毒精和华蟾毒他灵八种成份的含量，简便快捷，耗时短，有利于实现对蟾酥的质量进行有效全面的控制。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种蟾酥中多种化学成分的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱序列为：0min，20%B；2min，35%B；7min，53%B；14min，65%B；14.1min，35%B；15min，20%B；18min，20%B；

（2）对照品溶液制备：精密称取华蟾酥毒基，酯蟾毒配基，日蟾毒他灵，蟾毒灵，沙蟾毒精，蟾毒它灵，远华蟾毒精和华蟾毒他灵对照品为溶质，加入纯甲醇制成八种单项对照品标准溶液，精密吸取八种单项对照品标准溶液混合后，加入适量甲醇制成混合对照品标准溶液，即得；

（3）供试品溶液制备：取供试品，研细，取25mg，精密称定，精密加入甲醇10-20ml，称定重量，加热回流或超声处理30-60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10-20μl，依上述色谱条件进行测定，按外标法计算即得。

进一步优选的，步骤（1）中，确定的色谱条件的检测波长为296nm，流速为0.6-1ml/min，柱温25-30℃。

进一步优选的，步骤（2）中，八种单项对照品标准溶液的质量浓度均为1mg/ml，混合对照品标准溶液中各溶质的质量浓度均为0.1mg/ml。