[发明专利]检测甜瓜蚜传黄化病毒的方法及其专用多克隆抗体的制备在审

申请号：	201910653356.8	申请日：	2019-07-19
公开（公告）号：	CN110596381A	公开（公告）日：	2019-12-20
发明（设计）人：	韩成贵;时兴;张绍康;王颖;张宗英;李大伟;于嘉林;尚巧霞;王献兵;张永亮	申请（专利权）人：	中国农业大学
主分类号：	G01N33/569	分类号：	G01N33/569;G01N33/577;G01N33/68;C12N15/40;C07K16/10;C07K14/08;C12R1/94
代理公司：	11245 北京纪凯知识产权代理有限公司	代理人：	王灏增
地址：	100193 北京市海淀***	国省代码：	北京;11
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摘要：
搜索关键词：	多克隆抗体甜瓜黄化病毒新西兰大白兔氨基酸序列抗血清效价待测样品加强免疫经济意义瞬时表达运动蛋白可检测灵敏度种检测检测准确率一抗制备应用研究
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【说明书】：

本发明公开了一种检测甜瓜蚜传黄化病毒的方法及其专用多克隆抗体。本发明首先制备了氨基酸序列如序列表中序列4或序列6所示的MABYV‑MP蛋白，然后将MABYV‑MP蛋白作为免疫原对新西兰大白兔加强免疫，获得多克隆抗体。采用Western blot，以该多克隆抗体为一抗检测甜瓜蚜传黄化病毒的运动蛋白，在瞬时表达的条件下，MABYV‑MP抗血清效价可达1:256000，建议检测工作浓度1:10000至1：80000，该多克隆抗体不仅准确率高、灵敏度高，而且特异性好。本发明可检测待测样品是否含有甜瓜蚜传黄化病毒,具有重大的应用价值和经济意义；另外也为MABYV‑MP蛋白功能的研究打下基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测甜瓜蚜传黄化病毒及其运动蛋白的血清学方法及其专用多克隆抗体的制备。

背景技术

甜瓜蚜传黄化病毒(Melon aphid-borne yellows virus，MABYV)属于黄症病毒科(L uteoviridae)马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)，由蚜虫以持久非增殖型方式传播。MABY V既可以单一侵染，也可以和马铃薯卷叶病毒属的其他病毒复合侵染，病毒侵染局限于寄主植物韧皮部，被侵染叶片发生黄化和增厚，影响田间植株产量和品质。近年来，葫芦科作物感染MABYV的发病面积不断扩大，造成重大经济损失。

MABYV为正义单链RNA(+ssRNA)病毒，病毒粒子正二十面体球形，由180个蛋白亚基按照T＝3排列形成，直径为25-30nm。病毒基因组全长约5.7Kb，共含有7个开放阅读框，编码7个蛋白。MP蛋白由ORF4通过渗透扫描表达，在MABYV传播、复制和表达过程中发挥重要作用。

对于MABYV的检测，主要利用RT-PCR技术，而有关于MABYV的血清学检测尚未见正式报道。

发明内容

本发明的目的为检测和鉴定甜瓜蚜传黄化病毒及其运动蛋白。

本发明首先保护一种检测和鉴定甜瓜蚜传黄化病毒的方法，可包括步骤2)：采用以MA BYV-MP蛋白作为免疫原制备的抗体进行免疫检测。

上述方法中，所述MABYV-MP可为如下a1)或a2)或a3)或a4)：

a1)氨基酸序列是序列表中序列4所示的蛋白质；

a2)氨基酸序列是序列表中序列6所示的蛋白质；

a3)在序列表中序列4或序列6所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

a4)将a1)或a2)或a3)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。

序列表中序列4由191个氨基酸残基组成。序列6由199个氨基酸残基组成。

为了使a1)或a2)中的蛋白质便于纯化，可在序列表中序列4或序列表中序列6所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签(包括连接不同重复单元的标签和其他标签)。