[发明专利]环腺苷酸用于制备山羊精子冷冻保存用稀释液的应用及制备方法

说明书

本发明公开了一种环腺苷酸用于制备山羊精子冷冻保存用稀释液的应用及制备方法，本发明同时还提供了一种山羊精液冷冻保存用稀释液，包括环腺苷酸、营养物质、缓冲物质等。本发明的山羊精子冷冻保存用稀释液，具有提高精液冷冻保存后精子活率、顶体和质膜完整率，使得山羊的繁殖性能和经济效益有显著提高的效果。

技术领域

本发明属于动物生物技术领域，涉及动物繁殖技术，尤其涉及环腺苷酸用于制备山羊精液保存用稀释液的应用及制备方法。

背景技术

动物精液冷冻保存是将精液进行特殊处理，保存在超低温下，以达到长期保存的目的。但是精子在降温和冷冻保存的过程中，很容易产生各种损伤，包括物理性的、化学性的和生物性的损伤。与新鲜精液相比较，经冷冻-解冻处理的精液，其精子的成活率、精子活力、顶体完整率、线粒体活性和受胎率显著下降，而山羊的精液更是如此，这对于生产实践和科学研究来说是极其不利的因素。尽管山羊精液的冷冻保存技术已经有了长足的发展，但目前仍然存在很多问题有待解决。

环腺苷酸，全称腺苷-3',5'-环一磷酸，是一种参与细胞信号跨膜转导的重要第二信使，具有广泛的生理功能。配基与细胞膜上的受体结合后，激活G蛋白，进而激活腺苷酸环化酶，催化ATP生成环腺苷酸，发挥广泛的生理调控功能。目前并无将其用于动物精液冷冻保存技术的相关报道。

发明内容

针对现有技术的缺陷或者不足，本发明提供了一种环腺苷酸用于制备山羊精子保存用稀释液的应用及制备方法。

本发明同时还提供了一种山羊精子冷冻保存用稀释液，所提供的山羊精子冷冻保存用稀释液用于保存山羊精子，包括环腺苷酸。

具体的，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括环腺苷酸、营养物质以及缓冲物质。

更具体的，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括环腺苷酸、营养物质、缓冲物质、冷冻保护剂以及抗菌物质。

所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括环腺苷酸、果糖、柠檬酸钠、柠檬酸、碳酸氢钠、卵磷脂、二甲基亚砜、乙二醇、青霉素和链霉素。

此外，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液的pH值为7。

本发明所述的山羊精子冷冻保存用稀释液的制备方法，包括如下步骤：

(1)将柠檬酸钠0.25-1.25g，柠檬酸0.75-6g，碳酸氢钠0.062-0.5g，加50mL无菌水溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到A液；

(2)将果糖0.5-4g，卵磷脂0.125-1g，二甲基亚砜6-30mL，乙二醇6-30mL，加A液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到B液；

(3)将青霉素0.07-0.56g，链霉素0.06-0.48g，加B液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到C液；

(4)取环腺苷酸0.0012-0.0045g，加入C液50mL溶解后定容至100mL，离心取上清液即得到山羊精子冷冻保存用稀释液。

作为一种最优方案，包括如下步骤：

(1)将柠檬酸钠1.25g，柠檬酸3.35g，碳酸氢钠0.28g，加50mL无菌水溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到A液；

(2)将果糖2.25g，卵磷脂0.53g，二甲基亚砜18mL，乙二醇18mL，加A液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到B液；

(3)将青霉素0.25g，链霉素0.25g，加B液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到C液；

(4)取环腺苷酸0.0029g，加入C液50mL溶解后定容至100mL，离心取上清液即得到山羊精子冷冻保存用稀释液

本发明的有益效果是：