[发明专利]肝素钠用于制备山羊精子冷冻保存用稀释液的应用及制备方法

说明书

本发明公开了一种肝素钠用于制备山羊精子冷冻保存用稀释液的应用及制备方法，本发明同时还提供了一种山羊精子冷冻保存用稀释液，包括肝素钠、营养物质、缓冲物质、冷冻保护剂以及抗菌物质。本发明的山羊精子冷冻保存用稀释液，在精液降温、冷冻保存和解冻过程中对精子起到保护作用，减少损伤，明显提高了山羊冷冻精液的精子活力和顶体的完整率。

技术领域

本发明属于动物生物技术领域，涉及动物繁殖技术，尤其涉及肝素钠用于制备山羊精液保存用稀释液的应用及制备方法。

背景技术

精液冷冻保存是动物生物技术体系中的关键环节之一，主要解决精液长期稳定保存的问题。通过精液的人工采集和长期保存，实现动物生产的精液能够跨时间、跨地域、多种方式的被利用，从而极大提高了雄性动物在实际生产和科学研究领域中的使用价值。例如在动物育种领域，对于育种值估计、种质资源保护、品种改良、新品种育成、实现工厂化规模化养殖等方面，以及降低生产成本和提高经济效益具有重要意义。

研究表明，精子在降温和冷冻保存的过程中，很容易产生各种损伤，包括物理性的、化学性的和生物性的损伤。与新鲜精液相比较，经冷冻/解冻处理的精液，其精子的成活率、精子活力、顶体完整率、线粒体活性和受胎率显著下降，而山羊的精液更是如此，这对于生产实践和科学研究来说是极其不利的因素。尽管山羊精液的冷冻保存技术已经有了长足的发展，但目前仍然存在精液经冷冻-解冻处理后精子活力不高的问题。

发明内容

针对现有技术的缺陷或者不足，本发明提供了一种肝素钠用于制备山羊精子保存用稀释液的应用及制备方法。

本发明同时还提供了一种山羊精子冷冻保存用稀释液，所提供的山羊精子冷冻保存用稀释液用于保存山羊精子，包括肝素钠。

具体的，一种山羊精子冷冻保存用稀释液，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括肝素钠、营养物质以及抗菌物质。

优选的，一种山羊精子冷冻保存用稀释液，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括肝素钠、营养物质、缓冲物质、冷冻保护剂以及抗菌物质。

更优选的，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括肝素钠、果糖、柠檬酸三钠、柠檬酸、碳酸氢钠、卵磷脂、二甲基亚砜、乙二醇、青霉素和链霉素。

此外，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液的pH值为7。

本发明所述的山羊精子冷冻保存用稀释液的制备方法，包括如下步骤：

(1)将柠檬酸钠0.25-1.25g，柠檬酸0.75-6g，碳酸氢钠0.062-0.5g，加50mL无菌水溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到A液；

(2)将果糖0.5-4g，卵磷脂0.125-1g，二甲基亚砜6-30mL，乙二醇6-30mL，加A液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到B液；

(3)将青霉素0.07-0.56g，链霉素0.06-0.48g，加B液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到C液；

(4)取肝素钠0.002-0.008g，加入C液50mL溶解后定容至100mL，即得到山羊精子冷冻保存用稀释液。

更具体的，包括如下步骤：

(1)将柠檬酸钠1.25g，柠檬酸3.35g，碳酸氢钠0.28g，加50mL无菌水溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到A液；

(2)将果糖2.25g，卵磷脂0.53g，二甲基亚砜18mL，乙二醇18mL，加A液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到B液；

(3)将青霉素0.25g，链霉素0.25g，加B液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到C液；