[发明专利]一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法

权利要求书

1.一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，包括：将烟草样品进行萃取后获得的样品溶液，采用LC-MS/MS进行检测，通过HILIC色谱柱分离氨基酸及Amadori化合物，根据各种氨基酸及Amadori化合物的保留时间、母离子及子离子的质荷比定性，标准曲线法定量，确定样品溶液中氨基酸及Amadori化合物的含量。

2.根据权利要求1所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，所述氨基酸选自天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺中的一种或多种组合；所述Amadori化合物选自Fru-Ala、Fru-Pro、Fru-Phe、Fru-Asn、Fru-Asp中的一种或多种组合。

3.根据权利要求1所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，所述烟草样品要烘干后粉碎、过筛，获得粉末样品。

4.根据权利要求3所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，所述过筛的筛网网孔为60-80目。

5.根据权利要求1所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，所述萃取是将烟草样品加入盐酸水溶液和内标溶液，超声后离心，取上清液过滤后获得的样品溶液。

6.根据权利要求5所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，所述萃取包括以下条件中任一项或多项：

1)所述烟草样品加入的质量g与盐酸水溶液加入的体积mL之比为2:180-220；

2)所述盐酸水溶液为浓度为0.05-0.15mol/mL的盐酸水溶液；

3)所述内标溶液为含正缬氨酸的盐酸水溶液；

4)所述烟草样品加入的质量g与内标溶液加入的体积μL之比为2:180-220；

5)所述超声时间为25-35min；

6)所述离心的转速为3500-4500r/min，所述离心的时间为4-6min；

7)所述过滤为滤膜过滤。

7.根据权利要求6所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，条件3)中，所述内标溶液中正缬氨酸的浓度为2-4mg/mL；所述内标溶液中盐酸水溶液的浓度为0.05-0.15mol/mL。

8.根据权利要求1所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱法中，所述液相色谱的测定条件为：

色谱柱：HILIC色谱柱；柱温：20-40℃；进样量：0.1-0.5μL；流速：0.6-1.0mL/min；流动相A相：100-300mmol/L甲酸铵水溶液，以甲酸调节至pH＝2-4；流动相B相：乙腈；流动相C相：水；梯度洗脱。

9.根据权利要求8所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱的具体程序为：

0-10min，A相：B相：C相体积比为10：90：0-10：63：27；

10-15min，A相：B相：C相体积比为10：63：27-10：63：27；

15-16min，A相：B相：C相体积比为10：63：27-10：90：0。

10.根据权利要求1所述的一种测定烟草中氨基酸及Amadori化合物的HILIC色谱分析方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱法中，所述质谱的测定条件为：

电离方式：电喷雾离子源ESI，正离子模式；雾化气Gas1压力：50-70psi；干燥器流速：10-16L/min；干燥器气温度：300-400℃；毛细管电压：4000-6000V；质谱检测方式：DynamicMRM模式。