[发明专利]一种多功能靶向超声造影剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种多功能靶向超声造影剂，包括端羧基聚乳酸，其内填充氟碳气体形成端羧基聚乳酸微球，在端羧基聚乳酸中负载有苏丹黑染料，端羧基聚乳酸的羧基端通过共价键偶联有抗人VEGFR‑3单克隆抗体。该造影剂可以更精准、更有效的定位并牢固地结合到淋巴管内皮细胞表面，不仅具有较强的寻靶能力，而且具有超声造影显像和术中指示功能，还有预防肿瘤转移的作用，是一种兼顾蓝染示踪效果和超声显像效果以及治疗的多功能超声造影剂。本发明还公开了该造影剂的制备方法，利用双乳化法制备有蓝染指示功能的超声造影剂，并以EDC/NHS作为偶联活化剂，在其表面共价连接VEGFR‑3，方法简单，容易操作，适合大规模生产。

技术领域

本发明属于生物技术和医药技术领域，尤其涉及一种多功能靶向超声造影剂及其制备方法。

背景技术

在临床实践中，肿瘤前哨淋巴结的寻找通常采用两种方法：一种方法是放射核素示踪法，例如采用放射性同位素锝99m标记的葡聚糖、血浆蛋白等，这些物质在人体内可被放射性探测仪检测到；另一种方法是活性蓝染料示踪法，例如采用美蓝、异舒泛蓝等，它们能将淋巴结染成蓝色，从而在手术过程中被发现。虽然这两种方法在临床上沿用至今，但是也存在很多缺点，如辐射强、放射性探测仪探测到的图像空间分辨率低，不能准确为手术定位等；除此以外，由于同位素标记的是小分子的物质，因此不可避免地会进入第二级淋巴结而导致标记前哨淋巴结不准确。而且部分染料会引起部分病人产生过敏反应；还有部分病人因前哨淋巴结与非前哨淋巴过于靠近导致蓝染而无法区分，因此过多地切除了非前哨淋巴结；蓝染料的分子量小，极易穿透毛细淋巴管达到毛细血管导致皮肤色素沉着、假性低氧血症，进而导致手术时脉冲血氧饱和仪错读的干扰，更有甚者，发展成假性高铁血红蛋白症。

因此，研发一种既能通过超声造影模式准确观察到明显增强的肿瘤转移淋巴结，又能在术中准确指示前哨淋巴结，还能减少副作用的多功能超声造影剂，本技术领域而言具有十分重要的现实意义。

随着肿瘤相关淋巴管生成和淋巴转移机制研究的最新进展，人们已经认识到VEGFR-3在确定淋巴管生成反应方面至关重要。VEGF-C/VEGFR-3或VEGF-D/VEGFR-3信号途径在淋巴管新生过程中起着重要调控作用。在VEGF-C的作用下，肿瘤周围淋巴管的内皮细胞向肿瘤内迁移，生长构成新的淋巴管。VEGFR-3高表达于已发生淋巴转移的肿瘤，以VEGFR-3为靶标有助于标记肿瘤及淋巴转移的途径。Yulong He和他的团队在研究中证实了在肿瘤淋巴结扩散的早期，阻断VEGFR-3受体可以剂量依赖性的方式阻止肿瘤的淋巴结转移。抗VEGFR-3抗体可以在淋巴管内皮细胞、部分肿瘤细胞中表达。由于肿瘤细胞的迅速生长，肿瘤内机械性压力和渗透压显著升高，周围的淋巴管不易伸入肿瘤组织，导致肿瘤内的淋巴管比周围的淋巴管稀疏而塌陷。淋巴管新生主要发生在肿瘤边缘和周围，肿瘤中央部缺乏或无淋巴管。因此，具有抗人VEGFR-3单克隆抗体的靶向微泡可以选择性地附着淋巴管内皮细胞或一些癌细胞，并且还具有破坏VEGF-C/VEGFR-3或VEGF-D/VEGFR-3信号系统的潜在能力，预防肿瘤转移。然而，抗人VEGFR-3单克隆抗体仅具有靶向作用，具体如何结合超声造影显像和术中指示功能进而实现标记肿瘤及跟踪淋巴转移途径，是本技术领域亟需解决的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种多功能靶向超声造影剂及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为提供一种多功能靶向超声造影剂，包括聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA—COOH)，其内填充氟碳气体形成聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球，在聚乳酸-羟基乙酸共聚物中负载有苏丹黑染料，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的羧基端(—COOH)通过共价键偶联有抗人VEGFR-3单克隆抗体。