[发明专利]一种免疫细胞培养方法

说明书

本发明提供了一种免疫细胞培养方法，涉及免疫细胞培养技术领域。本发明所述方法从培养的第4d开始就转入FEP材质的细胞培养袋中，置于37℃的细胞培养箱中，同时利用联通管将细胞培养袋与装有细胞培养基的培养基保存袋连接，且将培养基保存袋置于4℃冰箱中。利用本发明所述方法进行免疫细胞的培养，培养过程从预培养后就进入封闭式培养，可以规避避免细菌污染；完全培养基在4℃保存，因子效价稳定，避免了营养物质37℃降解；细胞制品的无菌检测更加方便快捷，成本低。

技术领域

本发明属于免疫细胞培养领域，具体涉及一种免疫细胞培养方法。

背景技术

目前癌症治疗以手术和放化疗为主，复发可能性较高。医生为了更好的保护病人身体功能，手术时会尽可能的保留器官功能，但可能残留的肿瘤细胞会成为复发的隐患，放化疗对人正常细胞也有很大的破环作用，此时如果通过技术提前将患者的免疫细胞扩增纯化，等患者做完手术放化疗时，补充免疫细胞可大大的提高患者生存几率和生活品质。

现在免疫细胞大量运用于临床，传统免疫细胞培养时，多10d左右才进行一次细菌检测，不符合药典规定，且每次细菌检测时都有染菌风险，成本也高；同时培养过程中还存在生长因子37℃降解的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种免疫细胞培养方法，培养后很快开始进入密闭状态培养，保证检测结果的稳定性；保证免疫细胞充足的营养需求和合理的生长浓度；杜绝了培养基中生长因子在37℃的降解问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种免疫细胞培养方法，所述方法包括以下步骤：(1)分离新鲜外周血的单核细胞和血浆；

(2)调整所述单核细胞至200万个/mL后接种于培养瓶中，预培养4d，得预培养体系；

(3)将所述预培养体系无菌注入细胞培养袋中；所述细胞培养袋的材质为FEP；

(4)将细胞培养基注入培养基保存袋中，利用联通管将所述细胞培养袋和培养基保存袋进行连接，所述联通管上设置有可拆卸的三通止流阀；所述培养基保存袋的材质为PVC；

(5)将所述细胞培养袋置于培养箱中进行培养，所述培养箱内设置温度为37℃，CO₂浓度为5％；将所述培养基保存袋置于4℃冰箱内；

(6)利用所述三通止流阀将所述培养基保存袋中的细胞培养基转移至所述细胞培养袋中，所述转移的频率为1～2d/次。

优选的，步骤(1)所述分离包括离心和ficoll法分离。

优选的，步骤(3)所述细胞培养袋上开设有取样口和进样口。

优选的，步骤(3)所述细胞培养袋的容积为2L。

优选的，所述无菌注入的方法包括：在无菌操作台上，取一个50mL注射器，去掉推塞后，悬挂于支架上，同时利用软管将注射器的套筒与细胞培养袋的进样口连接，然后注入所述预培养体系。

优选的，步骤(4)所述培养基保存袋为2个，每个培养基保存袋的容积均为650mL。

优选的，步骤(5)所述培养的时间为10d。

优选的，在所述培养过程中，第6d进行一次细菌检测。