[发明专利]一种基于TdT信号放大技术的试纸条及其制备方法

说明书

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种基于TdT信号放大技术的试纸条及其制备方法，试纸条的结合释放垫上包覆树枝状纳米金复合物，树枝状纳米金复合物包括纳米金‑夹心适配体1‑PolyN1复合物和纳米金‑PolyN2复合物；反应膜包被夹心适配体2的检测限，包被与PolyN2互补的序列探针的质控线。制备包括：结合释放垫浸泡吸收含有树枝状纳米金复合物的缓冲液，干燥；含有标记链霉亲和素‑生物素的夹心适配体2的溶液与含有标记链霉亲合素‑生物素的与PolyN2互补的序列探针的溶液经划膜仪分别包被于反应膜上；沿层析方向将样品垫、结合释放垫、反应膜和吸收垫依次固定于背衬上。该试纸条放大检测信号，提高检测灵敏度。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种基于TdT信号放大技术的试纸条及其制备方法。

背景技术

目前对于恩诺沙星的检测手法主要有微生物法、四平板法、光生物感受器测定法、高效液相色谱法、薄屋层析法、液相色谱质谱联用法、超临界流体萃取法、高效毛细管电泳法、表面等离子谐振、免疫分析法等。但这些方法的缺点是仪器昂贵、操作复杂、样品的前期处理比较麻烦同时不具备即时性。其中高效液相色谱法是国标的方法，其检测限可以达到μg/kg级。但此方法前处理较麻烦、需要专业的人员进行操作、成本较高且所需测定时间较长，不适合现场检测。

目前试纸条比较适合现场的即时检测。层析技术具有速度快、抗基质干扰能力强、操作简单等优点，是即时检测的首选方法，同时在食品安全、医药卫生、环境保护等相关领域创新研究的热点。试纸条不需要专业技能和昂贵复杂仪器设备即可实现分析检测。广泛用于激素、病原微生物(病毒、细菌、寄生虫等)、肿瘤标记物、违禁药物、兽药、农药、生物毒素、毒品等靶标的快速检测。免疫层析试纸条快速检测技术是一种非常适合实时和现场检测的成熟技术，具有通用的检测模式、设备和工艺完备，研发时间短，产品上市快，易于大规模批量生产。

尽管目前试纸条的应用前景很是广泛，且可以检测出国标的最高检测限，但检测信号不是很明显，同时市面上的试纸条大多是抗体免疫层析试纸条，费用昂贵易污染，假阳性偏高。

胶体金层析试纸条正好可以规避这些弊端，不需要专业仪器，只需要插入对比即可，具有快速低沉本操作简单，能满足绝大部分食品样品的检测，适用于大量样品的筛选。

常规的胶体金试纸条灵敏度较低，难以实现目标物的快速分析，同时随着监管体系的完善和对检测力度的加强，食品中目标检测物的含量会越来越少，所以对试纸条的灵敏度提出了更高的要求。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种基于TdT信号放大技术的试纸条，放大检测信号，显著提高检测灵敏度，操作简便，易于控制，实现快速检测分析。

本发明还提供一种基于TdT信号放大技术的试纸条的制备方法，简便易操作，不需要专业仪器，成本低。

本发明的技术方案为，一种基于TdT信号放大技术的试纸条，背衬底板上沿层析方向依次固定样品垫、结合释放垫、反应膜和吸收垫，且依次相邻的两者间部分重叠；结合释放垫上包覆树枝状纳米金复合物，树枝状纳米金复合物包括纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物和纳米金-PolyN2复合物，纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物中修饰有PolyN1扩增序列的夹心适配体1以纳米金颗粒为中心呈辐射状分布，纳米金-PolyN2复合物中PolyN2序列以纳米金颗粒为中心呈辐射状分布，纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物与纳米金-PolyN2复合物通过互补杂交固定；PolyN1与PolyN2为互补序列，N1为A或T；反应膜上沿层析方向依次设有检测线和质控线，检测线包被夹心适配体2，质控线包被与PolyN2互补的序列探针；夹心适配体1和夹心适配体2为能够捕获目标检测物的DNA序列。

样品垫与结合释放垫间重叠部位长度为1～2mm，样品垫置于结合释放垫上方；结合释放垫与反应膜间重叠部位长度为1～2mm，结合释放垫置于反应膜上方；反应膜与吸收垫间重叠部位长度为1～3mm，吸收垫置于反应膜上方。