[发明专利]一种利用本土化土壤试验动物评估重金属污染土壤生态毒性的方法

权利要求书

1.一种利用本土化土壤试验动物评估重金属污染土壤生态毒性的方法，其特征在于，选用一种白线蚓即球肾白线蚓作为试验动物，对重金属污染土壤进行重金属的生态毒性效应试验；试验用白线蚓先预养一段时间，然后选择具有环带的健壮成体进行试验；正式试验前，先进行预试验；预试验方法是：在不同重金属浓度的土壤中放入一定数量比例的球肾白线蚓，控制土壤含水量在30-45％；然后置于温度15-25℃、湿度70-80％、光照的人工气候箱中进行预试验，确定最低致死浓度；参考预试验结果确定的最低致死浓度，设置正式试验的各浓度处理组的重金属暴露浓度，同时设置去离子水试验组作为对照；设置试验期间人工土壤的平均含水率在30％～45％之间；每组试验各设多个重复试验；各浓度处理组的每个重复试验中放入与预试验相同数量比例的球肾白线蚓，记录各浓度处理组的球肾白线蚓在暴露一定时间后的生存状况，并计算半数致死剂量LD₅₀值。

2.根据权利要求1所述的利用本土化土壤试验动物评估重金属污染土壤生态毒性的方法，其特征在于，具体按如下步骤进行：

(1)试验动物的选取

选用一种白线蚓即球肾白线蚓蚓作为试验动物，对重金属污染土壤进行重金属的生态毒性效应试验；试验用白线蚓先预养一段时间，然后选择平均重量为1.0-1.5mg具有环带的健壮成体进行试验；

(2)预试验

正式试验前，进行预试验：将一定量不同浓度的重金属去离子水溶液与一定量的人工土壤置于容器中混合均匀，使土壤中重金属浓度在0.1-1000mg/kg土壤干重，使土壤含水量达到30％～45％；人工土壤中，泥炭藓5-15％、高岭黏土15-25％、石英砂60-80％；各浓度处理组的每个试验中放入一定数量比例的球肾白线蚓；用薄膜封住容器口，扎孔透气；然后置于人工气候箱中进行预试验，温度设定为18-22℃，湿度为72-78％，24h光照；记录各浓度处理组的球肾白线蚓的生存状况，确定最低致死浓度；

(3)正式试验浓度设置

参考预试验结果确定的最低致死浓度，设置正式试验的重金属暴露浓度，同时设置去离子水试验组作为对照；

(4)试验动物放入量设置

每组试验各设2-4个重复试验；各浓度处理组的每个重复试验中放入与预试验相同数量比例的球肾白线蚓；

(5)人工土壤含水率设置

设置试验期间人工土壤的平均含水率在30％～45％之间；

(6)暴露时间设置

设置暴露时间为3-4d；

(7)按上述试验条件进行正式试验；

将不同浓度的重金属去离子水溶液与一定量的人工土壤置于容器中混合均匀，使土壤中重金属浓度达到步骤(3)设置的重金属暴露浓度，使土壤含水量达到30％～45％；人工土壤中含泥炭藓10-20％、高岭黏土10-20％、石英砂60-80％；每组试验各设2-4个重复试验；各浓度处理组的每个重复试验中放入与预试验相同数量比例的球肾白线蚓；用薄膜封住容器口，扎孔透气；然后置于人工气候箱中进行试验，温度设定为18-22℃，湿度为72-78％，24h光照；记录各浓度处理组的球肾白线蚓在暴露3-4d后的生存状况，并计算LD₅₀值。

3.根据权利要求2所述的利用本土化土壤试验动物评估污染土壤生态毒性的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，试验用白线蚓先预养一段时间，然后选择平均重量为1.2±0.2mg具有环带的健壮成体进行试验。

4.根据权利要求2所述的利用本土化土壤试验动物评估污染土壤生态毒性的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，正式试验前，进行预试验：将不同浓度的重金属去离子水溶液与人工土壤置于容器中混合均匀，使土壤中重金属浓度为0.1、1.0、10、100、1000mg/kg土壤干重，使土壤含水量达到40％；人工土壤中含泥炭藓10％、高岭黏土20％、石英砂70％；各浓度处理组的每个试验中每500g土壤放入100条球肾白线蚓；用薄膜封住容器口，扎孔透气；然后置于人工气候箱中进行预试验，温度设定为20±1℃，湿度为75％，24h光照；记录各浓度处理组的球肾白线蚓的生存状况，确定最低致死浓度。